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| 产品信息
品名:NebuEasy™ 猪多巴胺(DA)ELISA试剂盒
货号:NBE-235449
品牌:Nebulabio
规格:48T/96T
| 检测原理
| 产品属性
物种：猪
靶点信息：多巴胺(Dopamine)
检测范围：2pg/mL -65pg/mL
产品应用：NebuEasy™ 猪多巴胺(DA)ELISA试剂盒 （产品编号：NBE-235449）可用于测定猪血清、血浆及相关液体样本中多巴胺（DA）含量。
储存条件：4℃保存，有效期见标签
| 操作步骤
1.标准品稀释：
标准品编号 | 标准品浓度 | 标准品配置方法 |
5号标准品 | 60pg/mL | 将150μl的原始标准品加入150μl标准品稀释液 |
4号标准品 | 30pg/mL | 将150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 |
3号标准品 | 15pg/mL | 将150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 |
2号标准品 | 7.5pg/mL | 将150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 |
1号标准品 | 3.75pg/mL | 将150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 |
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同步骤3。
8.洗涤：操作同步骤5。
9.显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
| 计算结果
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
| 注意事项
1)标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。另外，本试剂盒不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
2)试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡1小时后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
3)浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
4)各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
5)请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
6)封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
7)底物请避光保存。
8)严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准
9)所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
