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凝胶过滤层析也称为体积排阻层析、分子筛层析，是依据目标分子尺寸大小，由大到小按顺序出峰，从而达到分离目的。
★凝胶过滤层析常用于杂质较少、后续的精纯阶段。
★凝胶过滤层析用在体积较小样品的纯化。
★在组群分离时（如脱盐）也可用在粗纯阶段。
★凝胶过滤层析分离时只需一种缓冲液，缓冲液种类几乎不影响分离效果，缓冲液中添加150mM的氯化钠可以有效降低目标蛋白的非特异性吸附。
凝胶过滤介质分离范围（球蛋白Da）
凝胶过滤介质分离过程
琼脂糖凝胶过滤介质
在琼脂糖凝胶的基础上高强度交联得到高流速琼脂糖凝胶(FF)，称为Focurose 4FF和Focurose 6FF，FF系列琼脂糖凝胶有良好的物理及化学稳定性，可进行湿热灭菌，可耐受蛋白生产中的各种工作条件。
应用案例
1.Focurose 4FF/6FF对不同分子量物质的分离
采用相同柱体积、上样量对比Focurose 4FF和6FF，相比4FF，6FF能更好分离IgG(160KDa)和细胞色素C(12.4KDa)。
2.Focurose 4FF纯化流感疫苗与进口品牌对比
采用相同柱体积、上样量和纯化方式对比Focurose 4FF 与进口品牌纯化流感疫苗的效果，从纯化图谱可知，两种填料分别对应的纯化图谱在峰形、起峰时间和收峰时间节点均保持一致，效果无显著差异。
3.Focurose 4FF纯化病毒
病毒分子量比HCP、杂质大，优先出峰。从图谱上反映出病毒与HCP、小分子杂质得到有效分离。
琼脂糖凝胶过滤介质列表
Tips
★装填柱子的径高比在1:15到1:100，装填太高反压增大。
★层析过程中上样体积应小于柱床体积的10%，尽量控制在5%以内。
★使用凝胶过滤层析时待分离的物质分子量相差2倍以上。
★凝胶过滤层析时尽量降低样品的粘度。
★层析样品中应避免存在固形物。
