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耐碱Protein A亲和介质产品说明书
1. 产品简介
Protein A能特异性地与抗体的Fc区结合，所以Protein A亲和介质可用于抗体（单抗和多抗）的分离纯化，经过一步亲和层析，即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体。耐碱Protein A QZT 4FF亲和介质以高流速琼脂糖凝胶为基质，以重组耐碱Protein A为配基，运用定点偶联的方法，介质具有优异的物理化学稳定性，配基不易脱落，寿命长。配基具备良好的耐碱性能，可以满足层析在线清洗操作中使用氢氧化钠溶液的需要。介质使用方便，应用广泛。
2. 产品特性
Protein A QZT 4FF亲和介质的理化性质和产品特性如表1所示。
表1 Protein A QZT 4FF亲和介质的理化性质和产品特性
| 参数 | 指标 |
| 基质 | 4%交联琼脂糖凝胶 |
| 配基 | 耐碱Protein A |
| 形状 | 球形 |
| 介质平均粒径 | 90 μm (45-165) |
| 配基密度 | 5-7 mg Protein A/ml wet gel |
| 动态载量 | 50-75 mg h-IgG/ml wet gel |
| 最高流速（25℃） | 500 cm/h |
| 推荐流速 | <150 cm/h |
| 最高耐压 | 0.3 MPa (3 bar) |
| pH稳定性 | 3-10（长时间）；2-11（短时间） |
| 保存 | 4-8 oC（20%乙醇） |
3. 使用方法
耐碱Protein A QZT 4FF广泛用于各种抗体的分离纯化。层析操作通常包括装柱、平衡、进料、淋洗、洗脱、再生等步骤。
平衡：用5-10CV的平衡缓冲液（20 mM PB+0.15 M NaCl，pH 7.0，添加适当浓度的NaCl抑制非特异性吸附）平衡层析柱，至流出液电导和pH不变（与平衡液一致）。
进料：样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。固体样品可用平衡液溶解配制；低浓度样品溶液可用平衡液透析；高浓度样品溶液可用平衡液稀释。为了避免堵塞层析柱，样品应经离心或微滤（0.45 μm）处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算。
淋洗：上样完毕后继续用平衡缓冲液淋洗至基线。
洗脱：用洗脱缓冲液（20 mM柠檬酸，pH 3.0；或0.1 M甘氨酸，pH 3.0；或20 mM乙酸钠，pH 3.0；具体洗脱条件与抗体的结合强度和稳定性密切相关，效果不好时应进行洗脱缓冲液（种类和pH或添加剂）的优化）洗脱，收集流出液。洗脱后，应立刻用碱性缓冲液（如1 M Tris/HCl, pH 9.0）将收集到的抗体溶液中和到抗体稳定的pH，避免抗体失活，维持抗体的生物活性。
再生、原位清洗：介质使用数次（5-10次，具体次数与原料的种类和来源及实验要求有关）后，需要对介质进行再生、在位清洗。
（1）用0.1 M的乙酸或0.1 M的乙酸/20%乙醇淋洗柱子3-5 CV，然后用缓冲液洗到中性即可重复使用；
（2）也可用0.1-0.5 M NaOH淋洗柱子3-5 CV，并用3-10 CV的纯水冲洗，然后用缓冲液洗到中性即可重复使用。
其它注意事项：在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。
4. 具体应用
载量分析：利用人免疫球蛋白（血浆来源，纯度95%，3 mg/ml）进行载量分析（柱体积0.5 ml；Buffer A：20 mM PB+0.15 M NaCl，pH 7.0，Buffer B：0.1 M甘氨酸，pH 3.0；流速：0.1 ml/min；上样量：20 ml），层析谱图如图1所示，结果表明介质载量在50-75 mg h-IgG/ml介质。
