猫骨髓白细胞丨其他原代细胞丨逸漠(immocell)

一、背景介绍

白细胞(英文名:leukocyte，white blood cell，简称:WBC)，旧称白血球。血液中的一类细胞。白细胞经复合染料染色后，可根据其形态差异和细胞质内有无特有的颗粒可分粒细胞和无粒细胞。无粒细胞又分为单核细胞与淋巴细胞两种。血液中有三种类型的淋巴细胞：B细胞、T细胞和NK细胞。粒细胞胞质内含有嗜色颗粒，分为中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞。在显微镜下可以看到，血细胞中体积比较大、数量比较少。具有细胞核。白细胞能吞噬异物产生抗体，在机体损伤治愈、抗御病原的入侵和对疾病的免疫方面有重要作用。

二、产品基本信息

细胞名称：猫骨髓白细胞

种属来源：猫

组织来源：骨髓

生长特性：大部分悬浮生长，小量贴壁生长

培养基：专用培养基

生长条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

传代方法：1:2至1:3，每周2- 3次

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

支原体检测：无

三、细胞培养操作

1)复苏细胞：将含有1 mL猫骨髓白细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有猫骨髓白细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将猫骨髓白细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL完全培养基，培养过夜)。第三天换液并检查猫骨髓白细胞密度。

2)细胞传代：如果猫骨髓白细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加入0.25%Trypsin-0.02% EDTA消化液于培养瓶中(T25瓶1-2ml，T75瓶2-3ml)，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min(难消化的细胞可以适当延长消化时间)，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加3-4ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

c、将猫骨髓白细胞悬液按1:2比例分到新的含6-8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)细胞冻存：待猫骨髓白细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使猫骨髓白细胞密度5×10⁶~1×10⁷/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

四、产品使用

1)本产品仅能用于科研

2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核

3)本产品未通过用于活体诊断的审核