人肝细胞HL-7702[L-02]

仅限于科学研究，不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。

T25 细胞到货处理

观察：

1、收到细胞后，请及时核对培养瓶上标注的细胞名称是否与订购的细胞名称一致以及培养 瓶是否有破损或漏液等异常情况。

处理：

1 、75%酒精棉球擦拭 T25 细胞培养瓶外部。

2、显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（40x,100x,200x 各一张）前 三天照片为重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。

3、不要打开培养瓶盖，将细胞放入 37 度培养箱中静置 3-4 小时后再做处理，以稳定细胞状 态。

4、收到细胞后，及时查看说明书是贴壁细胞还是悬浮细胞形态，并按常规贴壁或悬浮细胞 的传代方法操作。

贴壁：未超过 80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留 5ml 完全培养基， 放入 37℃、5%CO2 孵箱培养；超过 80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞 培养步骤。首次传代，建议 1:2 传代（两个 T25）。（传代时建议一瓶用原瓶里面的完全培养 基，另外一瓶用自己配的完全培养基，进行对比培养。）

特殊细胞注意事项：个别细胞贴壁不牢，在运输过程中发生细胞脱落，这是正常现象。  请将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm 离心 5min，收集上清（后期对比培养使用）， 沉淀加入胰酶 1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化 1-2 分钟后，加 5ml 完全培养基终止反应。再 离心，弃上清，加 1-2ml 完全培养基重悬。然后按 1:2 比例进行分瓶传代（两个 T25），补充 新的完全培养基至 5-8ml/瓶，最后放入 37℃,5%CO2 细胞培养箱中培养。

（注意：如收到密封培养瓶，处理完后放入培养箱培养时要将培养瓶盖子拧松）

冻存细胞到货处理

1 、收到细胞后，检查外包装情况和箱内是否还有干冰。如有外包装破损干冰已完全挥发等 问题，请即时联系。

2 、将细胞取出转移至液氮或－80 度冰箱保存，建议尽早复苏。

3 、复苏第一管如有活性状态问题及时与我们联系，会有技术人员与您沟通指导后再复苏第 二管。特别说明：未与我方联系擅自复苏第二管出现问题不予售后。

细胞复苏

1 、 从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2 、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3 、弃上清，沉淀用 5ml 完全培养基重悬，接种 T25 培养瓶，于 37℃,5%CO2 细胞培养箱中 培养；

4 、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。

细胞传代

1、细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 T25 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次： 2 、添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后 加入 5ml 完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管 中，1000rpm 离心 5min；

3 、弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 完全培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代（两个 T25）， 补充新的完全培养基至 5-8ml/瓶，最后放入 37℃,5%CO2 细胞培养箱中培养；

细胞冻存

1、细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 T25 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次； 2 、添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后 加入 5ml 完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管 中，1000rpm 离心 5min；

3 、 弃上清，沉淀细胞加入 1ml/支的 无血清冻存液 ，混匀后加入冻存管中。 （如：冻一支，加入 1ml 无血清冻存液）

4 、 将冻存细胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要将细胞转入液氮罐中，需在-80℃冰箱 存放 24 小时以上。