无血清细胞快速冻存液（-80℃直冻

成分与安全：

不含血清及动物源成分，化学组成明确，避免外源因子污染（如病毒、支原体）。

含保护性成分，如DMSO，减少冷冻损伤，提高细胞存活率（复苏活率>98%）。

保存说明：

保存：4℃保存，一年有效；运输：冰袋（2-8℃）或蓝冰运输。

操作便捷性：

1. 无需程序降温：可直接将冻存管置于-80℃冰箱冷冻，省去传统梯度降温步骤。

2. 即用型配方：无需额外配制，简化实验流程。

3. 保存稳定性。

4. 冻存细胞可在-80℃保存1-2年，长期保存建议转移至液氮（>5年）。

5. 冻存液本身在2-8℃ 保存12个月。

操作步骤：

细胞冻存

细胞准备

1、选择对数生长期、状态良好的细胞，确保无污染。

2、贴壁细胞：消化成单细胞悬液（推荐含EDTA的胰酶）。

3、悬浮细胞：直接离心（300g，5-10分钟）弃上清。

4、重悬与分装:1) 用预冷的冻存液重悬细胞，调整浓度为1×10⁶~1×10⁷/mL（推荐密度：2-5×10⁶/mL）。

2) 分装至冻存管（每管1-1.5mL），避免室温停留超过10分钟。

5、冷冻保存:1) 直接转移冻存管至-80℃冰箱，无需程序降温盒。

2) 长期保存：24小时后转入液氮罐（气相液氮更佳）。

细胞复苏

快速解冻

1、从液氮或-80℃取出冻存管，37℃水浴轻摇至仅剩微小冰块。

2、稀释与离心:1) 将细胞悬液转移至含预温培养基（体积为冻存液9倍）的离心管，轻柔混匀。

2)离心（300g，5分钟）弃上清，去除残留DMSO。

3、接种培养：用新鲜培养基重悬细胞，接种至培养容器，24小时后更换正常培养基。