Quick Cell支原体快速检测试剂盒(细胞培养专用)

订购信息

产品描述

Quick Cell支原体快速检测试剂盒(细胞培养专用)是专门用于快速检测细胞培养上清或别的液体样品(如血清)中是否存在支原体污染的试剂。本试剂盒操作简单，反应时间短，只需吸取1 μl细胞培养上清加入反应体系中，60℃孵育1h，肉眼观察即可判定结果，与传统检测支原体的PCR法优势明显。本试剂盒检测范围广，可以检测：(1)M.Hyorhinis、(2)M.Fermentans、(3)M.Arginini、(4)M. hominis、(5)M. orale、(6)M. salivarium、(7)M.pirum、(8)Acholeplasma Laidlawii、(9)M. agalactiae、(10)M.bovis、(11)M. buccale、(12)M. arthritidis、(13)M. pulmonis等几乎所有常见的污染细胞的支原体(注：M.为Mycoplasma的缩写)。以上13种支原体约占细胞支原体污染的99%以上。绝大多数支原体污染集中于前8种。因此非常适合于与细胞生物学相关的科研实验室及企业的日常支原体检测。

保存方法

-20℃保存。

使用方法

1.待测细胞培养上清收集

对于贴壁细胞，待测的样品最好来源于至少培养三天以上且汇合度在70-90%左右的细胞培养上清，中途不再换液，此时上清中支原体含量较高，便于检出，无需离心，直接吸取上清。对于悬浮培养的细胞，也需要在换液或者传代后让细胞生长3天以上，再取培养液进行检测，也无需离心，哺乳动物细胞的存在不会影响检测结果。

【注】：收集的待测细胞培养液样品如果不立即检测，请放于-20℃或-80℃冰箱保存。样品在-20℃至少可以保存一个月，在-80℃可以长期保存。

2.反应体系的配制

将溶液Ⅰ、Ⅲ从-20℃冰箱中取出，室温放置待其融化，液态溶液Ⅱ需一直置于冰上备用。溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ使用前各需1000 rpm离心30 s，用移液枪吹洗均匀。三种试剂按表1比例混合，吹打均匀后，按每管24 μL 的量分装到0.2 mL透明度良好的薄壁PCR管中。接着，往阳性对照管(Positive)中加入1 μL 阳性支原体DNA，往阴性对照管(Negative)中加入1 μL 无菌水，往测试管(Test)中加入1 μL 待测细胞培养液，反应液的总体积为25 μL。

【注】：装有阳性支原体DNA的螺口管开盖之前，用迷你离心机离心下；进行反应体系配制的房间，与进行样品前处理、加阳性对照DNA、样品DNA的房间最好分开。

表1：恒温反应体系的配制

【注】：每次实验加上一个阴性对照、一个阳性对照，便于结果的判断和分析。如有多个样品，为了避免移液时损失，分装时建议溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ用量乘以系数1.08，保证每个反应管中的反应液足量。

3. 反应

PCR仪设置程序：61℃，60 min，热盖温度，100 ℃。

【注】：若实验室所没有PCR仪，反应也可以在水浴锅中进行，需要在每管中加入25 μL矿物油，以防止液体蒸发导致结果不准确。水浴锅显示温度与实际温度的温差最好不超过0.5℃，放入已经升温到61℃的水浴内，准确反应60 min。

4. 结果判断

61℃反应60 min后，立刻取出反应管，放于室温。以一张白纸或白色泡沫盒为背景，通过反应管溶液颜色的变化，即可判断检测结果。如果溶液为蓝绿色，则说明有支原体污染；如果为紫红色，则说明没有支原体污染(如图1)。颜色反应如下图所示，也可以以阴性对照与阳性对照作为参考。

【注】：在61℃反应的时间必须准确计时，最多不得超过5 min，以免出现假阳性。反应产物不可开盖，防止产生气溶胶会导致假阳性的出现，必须在反应后2 h 内进行结果判断，避免室温下扩增反应进行，影响结果判别。在少数情况下(如支原体含量较低)，溶液颜色可能会介于紫色和天蓝色之间，此时可将反应时间继续延长到80 min，如果颜色变为蓝色，则判定为阳性，否则为阴性。

 

注意事项

1．必须确保使用的移液枪本身没有残留的支原体，尽量用新购移液器、新开封的枪头操作。整个操作过程，佩戴口罩，不要开口说话。由于本试剂盒非常灵敏，移液枪如吸附有，或者人为带入支原体均有可能造成假阳性。

2．最好使用带滤芯的吸头吸取溶液和阳性支原体等。如果没有带滤芯的吸头，至少应该使用新开封的吸头。

3．检测过程中，用过的各类吸头、离心管务必小心处理，应装入含有半瓶水的带盖的、可密封的垃圾瓶内。反应后的PCR管，不要开盖，用过后将其用自封袋密闭，扔到远离细胞房的独立垃圾桶内。

4．如果细胞被支原体污染，可以选购本公司或其他供应商提供的去除试剂尽早去除。

表2：Quick Cell 支原体快速检测试剂盒(细胞培养专用)的优势