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| GBfectene转染试剂操作流程图 | 特点： 1.转染效率高 2.蛋白表达水平高 3.毒性低，可用于原代细胞转染 4.操作简便，转染后无介质变化要求 注意事项： 1. 细胞的密度 转染时贴壁细胞的密度以70-80%为佳，而且转染时细胞应处在生长旺盛状态。细胞密度过高会影响转染效果。 2. 质粒DNA的质量 使用高纯度的质粒DNA也是转染试验中的关键因素。为了保证试验的最好结果，建议采用OD260/OD280在1.8左右，无蛋白、无RNA、无内毒素的DNA。 3. 血清的影响 在制备DNA/GBfectene-Elite复合体过程中不能添加血清，建议用无蛋白培养基（如DMEM或其它无蛋白培养基）稀释质粒和转染试剂，以达到复合物形成的最佳效果。但是，在随后的转染过程中，血清的存在并不影响DNA/GBfectene-Elite复合体的转染效果。 4. GBfectene-Elite的用量 对于一定量的DNA建议尝试4个不同剂量的GBfectene-Elite试剂进行优化实验，以确定最佳的转染效率。以24孔板为例，每0.5μg DNA可使用1.5μl、2.0μl、2.5μl和3.0μl GBfectene-Elite试剂作为初步实验条件。 |
操作流程：
| 以下操作步骤以24孔板为例，遵循以下操作方法可以高效地将DNA转染贴壁和悬浮培养的多种真核细胞。 | |
| A. 细胞铺板 | |
| 贴壁细胞数量：转染前的18-24个小时，在24孔板的每个孔中加入500 μl含有0.6-1.3 x 105个细胞的无抗生素生长培养基(确保转染时细胞密度在70-80%)。 | |
| 悬浮细胞数量：转染实验的当天，在24孔板的每个孔中加入500 μl含有1-2.5 x 105个细胞的无抗生素生长培养基。注意确保转染时细胞没有过度生长或处于休止期。 | |
| B. DNA/GBfectene-Elite转染复合物的制备 | |
| 1、将GBfectene-Elite转染试剂放置于室温中，使用前轻轻混匀。 2、将100 μl DMEM或其他培养液（无血清和无抗生素）加入无菌试管中。 3、在上述含有DMEM培养液的试管中加入0.5 μg 或1 μg待转染的DNA质粒等，并充分混匀。随后在管子中加入经优化实验得到的GBfectene-Elite 最佳用量（见下注解），快速涡旋混合使其完全混匀. 4、室温静置10分钟，从而获得100 μl DNA/GBfectene-Elite 转染复合物（注：该转染复合物在室温下可保质1 小时）。 | |
| C. 转染过程 | |
| 1、在每个细胞培养孔不同部位逐滴加入100 μl DNA/GBfectene-Elite的转染复合物（由步骤B制备所得），轻轻前后晃动培养板使其混匀。 2、放置在37 ℃，5%CO2培养箱中培养。 3、转染24-48小时后，收集细胞，并按要求进行检测。 | |
| 注解： GBfectene-Elite的用量： 对于一定量的DNA建议尝试4个不同剂量的GBfectene-Elite试剂进行优化实验，以确定最佳的转染效率。以24孔板为例，每0.5μg DNA可使用1.5μl、2.0μl、2.5μl和3.0μl GBfectene-Elite试剂作为初步实验条件。 | |
