内毒素检测试剂盒(鲎试剂显色法)

碧云天生产的内毒素检测试剂盒(鲎试剂显色法)，即Chromogenic LAL Endotoxin Assay Kit，是一种基于鲎试剂酶促反应原理，通过比色法定量检测细菌内毒素(endotoxin)也称脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)的超高灵敏度、高稳定性、强抗干扰能力的常用试剂盒。检测灵敏度可以低达0.01EU/ml，并且可以检测微量样品，样品的体积可以仅为10微升或更小体积。

本试剂盒首次启用后，适当保存至少在2个月内有效。基于鲎试剂的内毒素检测试剂盒，通常只能配制后立即使用，导致试剂盒的浪费。本试剂盒经过精心优化，确保首次配制成溶液后，按照说明书推荐的方法保存，至少2个月内有效。

本试剂盒检测时间短，样品需求量小。检测试剂加入到待测样品中最快16分钟左右，即可完成显色反应，从而实现简单、快速、高灵敏地检测内毒素含量；不依赖凝固蛋白形成凝胶，抗干扰能力强，可适用于本底颜色为淡黄色的样本，如血浆、血清等；对待测样品消耗量小，每个反应体系仅需使用10μl待测样品；含有偶氮化试剂，检测灵敏度高、测定样品的线性范围宽，并且可避免有色检品自身颜色对检测的干扰[1]。

用途：溶液样品中内毒素污染检测；各种不同类型样品中内毒素含量的定量检测。

原理：鲎试剂为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞裂解物的冷冻干燥品(Lyophilized Amebocyte Lysate, LAL)或体外重组的同类试剂，鲎试剂中含有C因子、B因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在适宜的条件下(温度，pH值及无干扰物质)，内毒素激活C因子，引起一系列酶促反应，激活凝固酶原形成凝固酶，凝固酶分解本试剂盒中提供的显色剂，使其分解为多肽和黄色的对·硝·基·苯·胺(pNA，λmax =405nm)。在一定时间内，pNA的生成量与内毒素浓度成正相关。同时，对·硝·基·苯·胺(pNA)也可与偶氮化试剂反应生成玫瑰红色产物(λmax =545nm)，据此可以定量待测样品的内毒素浓度，并可避免待测样品本身的颜色对405nm处吸收峰的干扰[2,3]。

检测灵敏度高。最低检测限可以达到0.01EU，可以自行选择的有效检测区间为0.1E -1.0EU/ml或0.01 -0.10EU/ml。具体的检测效果请参考图1。

图1.碧云天生产的内毒素检测试剂盒(鲎试剂显色法) (C0276)检测标准曲线的效果图。取配制好的下列浓度的内毒素标准品溶液：0.000、0.010、0.025、0.050、0.075、0.100EU/ml (A)及0.00、0.10、0.25、0.50、0.75、1.00EU/ml (B)各10μl，用本试剂盒进行显色反应及标准曲线的检测。实际检测时会因检测仪器等实验条件的的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

一个包装的本试剂盒共可以检测160个样品(含标准品)。

4ºC保存，两年有效。内毒素检测试剂溶解后须立即适当分装，-20ºC保存一周有效，经液氮速冻后-80ºC保存至少两个月有效。其余试剂溶解后-20ºC保存，至少6个月有效。

内毒素检测试剂溶解后很不稳定，需要尽量在10分钟内使用完毕或适当分装后保存。因此试剂盒在使用过程中需要预先做好各项准备工作，在需要加入内毒素检测试剂前再溶解内毒素检测试剂，或解冻之前分装冻存的内毒素检测试剂。

实验所用的器皿需经预处理，以去除可能存在的外源性内毒素，常用的方法是在250ºC干烤至少60分钟，也可以采用其它确保不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。若使用塑料器械，应选用表明无内毒素并且对实验无干扰的器械。

实验操作过程应防止微生物的污染。

溶解并稀释后的内毒素标准品溶液静置时间若超过10分钟，使用前应在旋涡振荡器上振荡混匀1分钟。冻存的溶解后的内毒素标准品，下次使用时须先充分溶解，并剧烈涡旋混合后使用。

本试剂盒中的内毒素检测试剂溶解后，须立即适当分装，-20ºC保存一周有效，经液氮速冻后-80ºC保存至少两个月有效。务必避免反复冻融。

样品的稀释和制备，推荐使用碧云天的无内毒素超纯水ST878 BeyoPure™ Ultrapure Water (Sterile, Endotoxin-Free)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。