支原体PCR检测试剂盒

碧云天生产的支原体PCR检测试剂盒(Mycoplasma PCR Detection Kit)，是一种通过巢式PCR法(Nested PCR)检测培养细胞等生物材料中是否存在支原体污染的检测试剂盒。
支原体(Mycoplasma)是最小、最简单的原核生物。支原体有如下特征：支原体无细胞壁结构，所以针对细胞壁的许多常见的抗生素，如青霉素或β-内酰胺类抗生素对支原体无效；支原体大小介于细菌和病毒之间，约为0.2-0.8μm，所以部分支原体可通过0.22μm滤器，常规的过滤对支原体无效；很多支原体由于自身的生物合成能力有限而依靠宿主提供营养，所以通常吸附或散落在细胞表面和细胞之间。支原体的这些特征使细胞培养过程中存在支原体污染的风险，细胞的支原体污染已经成为一个世界性的普遍问题。
支原体污染可能会严重影响细胞的状态，使细胞的基因表达、代谢特征发生变化，导致细胞生长减缓、分化和死亡异常，严重影响细胞功能。这些影响因素会严重影响实验结果的可靠性、可重复性和一致性，因此支原体污染的检测非常重要。
细胞培养过程中的细菌、酵母或霉菌污染在光学显微镜下可见，但支原体污染在光学显微镜下通常不可见，必须通过特定的检测方法进行检测。检测支原体污染的常用方法有支原体分离培养、ELISA、发光法等特殊的生化检测以及DNA荧光染色检测等。上述检测方法中，大多操作步骤相对比较烦琐、灵敏性不高、不能区分支原体种类、需要特殊仪器或所需时间较长。而PCR法操作相对比较简单便捷，PCR扩增后通过电泳分析即可确定是否有支原体污染，并可根据扩增片段的大小大致预测至少11种所污染的支原体种属。如果有必要，也可以对PCR产物进行常规测序以确定具体的支原体种属。
本支原体PCR检测试剂盒是利用两对引物通过巢式PCR法特异性扩增支原体基因组DNA片段，从而实现对支原体的高灵敏度特异性检测的。原核生物的rRNA碱基序列非常保守，而rRNA操纵子上编码rRNA的DNA间隔区(space region)在各种生物种间的碱基序列差别很大，如16S和23S之间的间隔区。这个间隔区的DNA序列及长度在支原体各个种属间既有非常保守的部分，也有较大差异的部分。在编码16S和23S的保守区DNA上设计一对F1/R1引物，用于扩增16S和23S之间的间隔区，这就是巢式PCR的第一轮PCR (1st PCR)，用于初步鉴定是否有支原体污染；然后在编码16S和23S rRNA的DNA间隔区的保守区上设计一条F2引物，在编码23S rRNA的DNA上设计一条R2引物进行巢式PCR的第二轮PCR (2nd PCR)。通过巢式PCR可以大大提高检测的特异性和灵敏度。本产品的检测原理请参考图1。

图1. 支原体PCR检测试剂盒的检测原理图。

本试剂盒可快速、有效、高灵敏度地检测支原体污染。
本试剂盒提供了阳性对照Control template，便于确定PCR检测是否能正常工作，及样品中是否存在抑制PCR反应的物质。
如果发现有支原体污染，建议更换无污染的细胞进行培养。如果有必要预防或去除支原体，可以使用专用的支原体预防或去除试剂(C0288、C0290、C0292、C0293)。
如果用于20μl的PCR反应体系，本试剂盒共可以进行250次检测。如果用于50μl的PCR反应体系，本试剂盒共可以进行100次检测。
包装清单：

保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
由于PCR反应非常灵敏，可以扩增目的基因序列超过1000万倍，在使用Taq酶时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
一般情况，1st PCR可以初步鉴定是否有支原体污染，但建议进行2nd PCR以进一步确认。
本试剂盒不能检测出人肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae)。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。