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BL21（DE3）PLYS感受态细胞说明书
一、简介 大肠杆菌经Ca离子处理后可摄取外源DNA（Plasmid、Phage DNA），处于这种状态的细胞称作感受态细胞（Competent Cells）。在进行基因重组实验时，使用感受态细胞的转化实验应用十分广泛。制作基因文库、重组质粒体以及进行亚克隆实验时，特别是在目的基因含量十分低的情况时，使用高效的感受态细胞十分重要。 本公司生产的最新一代感受态细胞是采用大肠杆菌经特殊工艺处理得到的感受态细胞，使用pUC19质粒检测，转化效率可达107-108，在-70℃下保存几个月转化效率不发生改变。
二、使用方法 （1）取出感受态细胞（100ul），置于冰上5min，解冻。 （2） 将100ul体系双蒸水加入感受态细胞，使用枪轻轻吹打均匀，弃掉100ul感受态细胞。（2）然后将连接体系（5~10ul）加入感受态中（～100ul），轻弹感受态离心管底部，混匀，冰浴30分钟。 （3）将离心管放入42℃水浴90秒后，迅速放于冰上。 （4）每管中加900μl LB(SOC)培养基(不含抗生素)，37℃振荡培养1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。（5）室温4,500rpm离心5分钟，弃去900μl上清后，用剩余100μl培养基重悬细胞并涂布到含Amp的LB琼脂平板或含X-gal、IPTG、Amp的LB琼脂平板表面。 （6）将平板置于室温直至液体被吸收。 （7）倒置平皿，于37℃培养，12~16小时后可出现菌落。
三、注意事项 １. 用此感受态进行转化需要热激，不能电转化，请勿分装。 2 . 感受态细胞应保存在 -70 ℃，不可多次冻融和放置时间过长，以避免降低感受态细胞的转化效率。 3 . 为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到最低。 4 ．所有操作均需注意无菌操作。
