Super-Enhanced Cell Counting

碧云天研发生产的Super-Enhanced Cell Counting Kit-8，简称Super-Enhanced CCK-8试剂盒或超强型CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8用于细胞活力、增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测的试剂盒。本试剂盒仅需0.5至1小时即可完成检测，和普通或增强型CCK-8试剂盒相比，检测速度更快、灵敏度更高、线性范围更宽。本试剂盒适用于在450nm左右测定吸光度。

WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan (参考图1)。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系[1]。本试剂盒经过多方面的反复优化，通过测定formazan的吸光度就可以非常高效、线性、准确地测定细胞活力。

图1.碧云天Super-Enhanced Cell Counting Kit-8 (超强型CCK-8试剂盒) (C0048)检测原理图 (EC=Electron coupling reagent，即电子耦合试剂)。

WST-8是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先，MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。其次，WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更加稳定，使实验结果更加稳定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比线性范围更宽，灵敏度更高[2]。

WST-8和WST-1相比，检测灵敏度更高，更易溶解，并且更加稳定。

本试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。

本试剂盒经过优化，大大缩短孵育时间，一般仅需0.5小时即可完成检测。本试剂盒与增强型CCK-8试剂盒(C0041)用于HeLa细胞活性检测效果的对比图参见图2，检测试剂加入后仅需孵育0.5小时，5万个HeLa的信号强度即可以达到约3.5，信号强度是增强型CCK-8试剂盒的3倍左右。

图2.碧云天Super-Enhanced Cell Counting Kit-8 (超强型CCK-8试剂盒) (C0048)和Enhanced Cell Counting Kit-8 (增强型CCK-8试剂盒) (C0041-C0046)对不同数量HeLa细胞的检测效果对比图。不同数量的HeLa细胞100μl每孔接种于透明96孔板，培养2.5小时后每孔分别加入本产品和增强型CCK-8溶液各10μl，孵育0.5小时后测定A450，在5万个细胞内信号强度与细胞数之间呈现出良好的线性关系，细胞数量超过5万、或者孵育时间超过0.5小时后可能会不呈现线性关系，但信号值还是会继续升高的。实测数据会因具体实验条件的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本试剂盒检测非常便捷。试剂盒仅一管已经配制好的超强型CCK-8溶液，无须再进行任何配制等操作。无须使用同位素，所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。不必洗涤细胞，不必收集细胞，也不必采用额外的步骤去溶解formazan。可以用于大批量样品的检测。

酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。

本产品对细胞无明显毒性。加入超强型CCK-8溶液显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读板，使检测时间更加灵活，便于找到最佳测定时间。

碧云天同时提供一系列CellTiter-Lumi™发光法细胞活力检测试剂盒，该类试剂盒是通过化学发光法测定细胞内ATP含量从而用于超快速、超高灵敏度、高信号稳定性定量检测细胞总体活性，通常10分钟内就可以完成一个96孔板的超灵敏检测。

碧云天各种细胞增殖和细胞毒性检测试剂盒的比较和选择，请参考http://www.beyotime.com/support/cell-proliferation.htm。

按照96孔板每孔100μl细胞需要10μl超强型CCK-8溶液，本试剂盒每1ml可以进行100次检测。

-20℃避光保存，一年有效。4℃避光保存，至少2周内有效。

本试剂盒反复冻融会降低检测效果。尽管经测试本试剂反复冻融3次对于其检测效果无显著影响，为取得良好的使用效果，第一次解冻后可适当分装保存。反复冻融过程中，可能会出现少量沉淀，此时宜平衡至室温，并尽量溶解。如果预计在2周内能使用完毕，解冻后也可以保存在4℃。

温度的高低会影响信号强度和信号稳定性，反应前细胞和超强型CCK-8溶液均需平衡至室温后再进行测定，可将超强型CCK-8溶液在不超过25℃的室温或20-25℃的水浴中融解并混匀后使用。

由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问题。一方面，由于96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加相同量的PBS、水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。

本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，所以还原剂(例如一些抗氧化剂)会干扰检测，如果待检测体系中存在较多的还原剂，需设法去除。

用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。