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NDETM3000转染试剂
产品介绍：
NDETM3000转染试剂是威斯腾生物研发的一款新型阳离子聚合物（非脂质体）转染试剂。NDETM3000带有更高的正电荷，能够高效压缩DNA/RNA，将DNA/RNA包裹在聚合物的内部，通过细胞自身的胞吞作用，进入细胞内吞体中，然后通过吸收内吞体中的H+，改变其PH值，使内吞体解体，将DNA/RNA释放到细胞质中，实现DNA/RNA的高效转染。
产品特点：
NDETM3000转染试剂具有以下特点：
——转染效率高
——温和低毒
——性价比高
——易于针对广泛的细胞类型进行优化
目前已验证NDETM3000可以高效转染(>80%)的哺乳动物细胞系有：HEK293、HeLa、CHO、COS；昆虫细胞系有：Sf9和Sf21；对其他细胞系也有一定的转染效率，包括某些原代细胞系，在优化的条件下可实现40-60%的转染效率。
此外，可以使用NDETM3000进行腺病毒、慢病毒和腺相关病毒高效包装，其中慢病毒初始液滴度最高可达107TU/ml，经超离或超滤浓缩后，最终滴度可达109TU/ml（病毒包装优化步骤可以登陆威斯腾生物官方网站查询下载）。
贴壁细胞转染步骤：
以6孔板培养体系为例，进行哺乳动物细胞系转染。其他培养体系，参考表1调整。
1.转染前一天，将细胞接种6孔板，使转染时细胞汇合率达60—80%；
注意：细胞状态对任何转染试剂的转染效率都有着至关重要的影响，在转染前，应该观察细胞状态是否良好；对于刚复苏的细胞，建议传三代后再进行后续转染实验，以保证细胞处于旺盛生长期。
2.转染前1-2h，更换2ml新鲜DMEM+5%FBS培养基；
注意：对于293系列易转染的细胞系可以不换液；而要得到很好的转染效果，建议使用2%-5%的血清可以得到更高的转染效率。
3.向1.5ml无菌EP管中加入100μl Opti-MEM（或者其他无血清培养基），随后吸取2μg质粒转移至Opti-MEM中，轻轻混匀，室温静置5分钟；
注意：Opti-MEM和质粒从冰箱取出后，先让其恢复至室温，然后再进行转染操作；质粒在转染前请混合均匀。
4.取3～4μl NDE3000转移至Opti-MEM中，轻轻混匀，室温静置15分钟；
注意：NDE3000从冰箱取出后，先让其恢复至室温，然后再进行转染操作；在转染前请混合均匀。
5.静置完毕，用枪头轻轻来回吸打上一步混合液3次后，再转移混合液至细胞培养基中，轻轻摇匀，将细胞放回37°C培养箱中继续培养；
注意：来回吸打混合液可以更充分地分散NDE3000与质粒DNA形成的复合物。
6.16-20h后，更换新鲜的完全培养基，继续培养24-72h后检测基因表达。
注意：转染24小时可以检测到目的基因表达，但RNA和蛋白最高丰度表达分别出现在48小时和72小时。
Table .1 不同培养皿NDETM3000转染试剂用量
| 培养皿规格 | 表面积（cm2） | 接种细胞数(个) | 培养基量（ml） | 稀释液体积(μl) | DNA的量（μg） | NDE3000的量(μl) |
| 96孔板 | 0.3 | 1.2-2.4X104 | 0.1 | 10 | 0.1-0.2 |
以质粒ug数乘以1.5-2 ul，例如2μg质粒，需要3-4ul NDE3000 |
| 48孔板 | 1.0 | 4-8X104 | 0.2 | 20 | 0.2-0.4 | |
| 24孔板 | 1.9 | 0.8-1.6X105 | 0.5 | 50 | 0.5-1.0 | |
| 12孔板 | 3.5 | 1.5-3X105 | 1 | 50 | 1-2 | |
| 6孔板/35mm | 9.6 | 4-8X105 | 2 | 100 | 2-4 | |
| 60mm | 21 | 0.9-1.8X106 | 4 | 200 | 6-12 | |
| 100mm | 58 | 2.2-4.4X106 | 10 | 500 | 12-24 | |
| T75 | 75 | 3-6X106 | 15 | 1500 | 18-36 |
悬浮细胞转染步骤：
以250ml Shake flask（振荡培养瓶）培养体系为例：
1.转染前2小时，接种5.0*107细胞至250ml Shake flask；
注意：细胞状态对任何转染试剂的转染效率都有着至关重要的影响，在转染前，应该观察细胞状态是否良好；对于刚复苏的细胞，建议传三代后再进行后续转染实验，以保证细胞处于旺盛生长期。
2.向15ml 离心管中加入2.5ml Opti-MEM（或者其他无血清培养基），随后吸取50μg质粒转移至Opti-MEM中，轻轻混匀，室温静置5分钟；
注意：Opti-MEM和质粒从冰箱取出后，先让其恢复至室温，然后再进行转染操作；质粒在转染前请混合均匀。
3.取100μl NED3000转移至Opti-MEM中，轻轻混匀，室温静置15分钟；
注意：NED3000从冰箱取出后，先让其恢复至室温，然后再进行转染操作；在转染前请混合均匀。
4.用枪头轻轻来回吸打上一步混合液3次后，再转移混合液至细胞培养基中，轻轻摇匀，将细胞放回37度培养箱中继续振荡培养2～3小时。
5.添加25ml新鲜完全培养基后继续培养36-72h后检测基因表达。
注意：转染24小时可以检测到目的基因表达，但RNA和蛋白最高丰度表达分别出现在48小时和72小时。
