BeyoWB™ 80分钟电泳转膜与Western检测试剂盒

碧云天研发生产的BeyoWB™ 80分钟电泳转膜与Western检测试剂盒(BeyoWB™ 80 min Electrophoresis, Transfer and Western Blot Kit)，也称超快速电泳转膜与Western检测试剂盒(Superquick Electrophoresis, Transfer and Western Blot Kit)，是一种通常电泳仅需25分钟、转膜仅需10分钟、从完成转印的膜到获得目的蛋白条带仅需30分钟，总计通常不超过80分钟就能实现从蛋白样品到目的条带的超快速电泳转膜与Western检测试剂盒。

本试剂盒组分齐全，仅需自备一抗、二抗、水、无水乙醇及电泳、转印和成像设备。本试剂盒包含BeyoWB™ SDS-PAGE上样缓冲液(5X)、兼容不同分子量大小目的蛋白的BeyoGel™ Elite PAGE预制胶(Tris-Gly, 4-20%, 15孔)、BeyoWB™电泳液、BeyoWB™转膜液、BeyoWB™ PVDF膜 (6.6×8.5cm, 0.45μm)、BeyoWB™转膜海绵垫(免滤纸)、BeyoWB™封闭液、BeyoWB™抗体稀释液、BeyoWB™ Western洗涤液、BeyoWB™ BeyoECL A液和B液。本试剂盒使用便捷，能够显著缩短电泳、转膜、封闭、一抗和二抗孵育等的时间，试剂盒中包含从蛋白样品到化学发光所需的绝大部分溶液和耗材，用户仅需自备一抗、二抗、水、无水乙醇及电泳、转印和成像设备，从蛋白样品到获得目的条带通常仅需80分钟，可以极大加快电泳、转膜和Western的检测速度。

本试剂盒特别适用于有使用相应一抗和二抗进行Western检测经验的情况，此时使用原有的一抗和二抗配合本试剂盒通常就能在80分钟内实现从蛋白样品到获得预期的目的蛋白条带。经实测，大多数情况下使用本试剂盒的效果优于原常规检测方法。使用本试剂盒的实际检测效果，请参考图1。图中仅展示了部分检测结果，实测对于更多的一抗和二抗，本试剂盒在绝大多数情况下都具有相近或更优的检测效果。

图1.碧云天BeyoWB™ 80分钟电泳转膜与Western检测试剂盒(P0002)与常规Western检测效果的比较图。图中BeyoWB™为使用本试剂盒的检测效果，实验条件为：BeyoWB™封闭液封闭5分钟；BeyoWB™抗体稀释液稀释一抗(1:1000)，室温孵育15分钟，BeyoWB™洗涤液洗涤30秒3次；BeyoWB™抗体稀释液稀释二抗(1:500)，室温孵育5分钟，BeyoWB™洗涤液洗涤30秒3次；发光检测使用BeyoWB™ BeyoECL。Control为常规Western的检测效果，实验条件为：QuickBlock™ Western封闭液(P0252)封闭10分钟；QuickBlock™ Western一抗稀释液(P0256)稀释一抗(1:1000)，室温孵育1小时，Western洗涤液洗涤5分钟3次；QuickBlock™ Western二抗稀释液(P0258)稀释二抗(1:1000)，室温孵育1小时，Western洗涤液洗涤5分钟3次；发光检测使用BeyoECL Star (特超敏ECL化学发光试剂盒) (P0018A)。293T和HeLa细胞裂解液的蛋白浓度均为2mg/ml。所用一抗分别为：Histone H3 Rabbit Polyclonal Antibody (AF7104)、Phospho-MEK1 (Ser218/222) Rabbit Monoclonal Antibody (AF1786)和β-Catenin Mouse Monoclonal Antibody (AF0069)；对应的二抗分别为：BeyoWB™ HRP标记山羊抗小鼠IgG(H+L) (P0946)和BeyoWB™ HRP标记山羊抗兔IgG(H+L) (P0948)。Western印迹成像由BeyoImager™ 600化学发光成像系统(EI600)完成，同组比较时的曝光时间相同，箭头所示为目的蛋白。如图所示，本试剂盒检测效果与常规Western相近甚至更优。对于本试剂盒和常规Western方法检测的上述印迹膜分别进行自动曝光时，本试剂盒的效果也显著优于常规Western检测方法。实际实验结果会因样品、抗体、实验条件等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

Western，也称Western blot、Western blotting、Western印迹，常简写为WB，是用抗体检测蛋白水平的重要方法之一[1]。常规Western检测从转膜后到获得蛋白条带通常需要3小时以上甚至过夜，影响实验效率。通常电泳需要60-90分钟，转膜需要30-60分钟，也比较耗时。而碧云天的BeyoWB™ 80分钟电泳转膜与Western检测试剂盒，通常电泳仅需25分钟，转膜仅需10分钟，转膜后通常30分钟内就可获得目的蛋白条带，大大节约了实验时间。

本试剂盒中的BeyoWB™ SDS-PAGE电泳液(Tris-Gly)和传统的SDS-PAGE电泳液相比，可以大幅加快电泳速度，缩短电泳时间。推荐150V-200V恒压电泳，通常20-35分钟就能完成电泳，对于4-20%的预制胶仅需180V电泳25分钟。本电泳液含有SDS，适用于变性胶蛋白电泳。

本试剂盒中的BeyoWB™转膜液使用方便、产热量少、无需冰浴。使用BeyoWB™转膜液进行转膜时，无需任何冰浴措施，包括转膜液预冷、内置冰盒及外置冰浴处理等，室温下即可将蛋白高效转移到印迹膜上，不影响转膜效果。在环境温度为25ºC或以下时，转膜15分钟后转膜液的温度通常仅升高5-10ºC，产热量少。

本试剂盒中的BeyoWB™封闭液封闭时间仅需5分钟，总体效果显著优于传统的基于BSA (牛血清白蛋白)、脱脂奶粉、酪蛋白(Casein)等的封闭液。

本试剂盒中的BeyoWB™抗体稀释液针对Western进行了深度优化，可同时用于一抗和二抗的稀释，用其配制的一抗工作液孵育时间仅需15分钟，二抗工作液孵育时间仅需5分钟。本产品稀释和配制的抗体工作液，可以在4ºC保存和使用不少于1个月，并且可以重复使用。

本试剂盒中的BeyoWB™ Western洗涤液用于Western时一抗或二抗孵育后的洗涤，每次洗涤时间仅需30秒即可达到理想效果，降低背景，增强信噪比。

本试剂盒中的BeyoWB™ BeyoECL化学发光试剂，灵敏度极高、背景低、发光时间长，成像效果极优。

本试剂盒提供了从蛋白样品准备到化学发光所需的几乎所有的通用试剂和耗材(包括预制胶、PVDF膜和转膜海绵垫)，用户仅需自备在常规Western中使用的一抗、二抗、水、无水乙醇及电泳、转膜和成像设备，即可在80分钟内获得与常规Western检测相似或更优的目的条带。

按照试剂盒提供的预制胶和预裁切的PVDF膜，按照每次电泳需要BeyoWB™ SDS-PAGE电泳液500ml (每次两块胶同时电泳)，转膜需要BeyoWB™转膜液1000ml (每次两块胶同时转膜)，封闭需要BeyoWB™封闭液5ml、稀释一抗和二抗的BeyoWB™抗体稀释液各5ml，稀释后的一、二抗重复使用3次，洗涤液每次使用10ml，BeyoWB™ BeyoECL工作液每次需要1ml计算，本试剂盒小包装和中包装分别可以进行6次和30次的Western快速检测。如果检测的是更常见的裁切后的约2×8.5cm印迹膜，按照封闭以及一、二抗孵育液体用量为每次2ml，洗涤液用量每次4ml，发光试剂工作液用量每次0.4ml计算，小包装和中包装分别可以检测15次和75次。

包装清单：

保存条件：

预制胶4ºC保存，一年有效，切勿置于0ºC以下冷冻。其余均可-20ºC保存，一年有效。整个试剂盒4ºC保存，至少3个月有效；室温保存3天，不显著影响使用效果。BeyoWB™ BeyoECL A液和B液须避光保存。PVDF膜和海绵垫，可以室温或4ºC保存，至少一年有效。

注意事项：

请注意回收使用过的一抗工作液和二抗工作液。回收的一、二抗工作液可以再重复使用2次。稀释后的一、二抗工作液，包括使用过的一、二抗工作液，请4ºC保存。

回收后重复使用的一、二抗工作液，使用方法同新鲜稀释的一、二抗工作液。如果在重复使用过程中发现一、二抗工作液出现轻微混浊现象，可以10,000×g离心1-3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的一、二抗工作液出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。

使用本产品，通常80分钟可得到高质量的目的蛋白Western结果，即蛋白样品变性3-5分钟、电泳25分钟、设置转印三明治3-5分钟、转膜10分钟、封闭5分钟、一抗孵育15分钟、洗涤30秒3次、二抗孵育5分钟、洗涤30秒3次、BeyoWB™ BeyoECL试剂孵育30秒、成像通常0.5分钟之内。

对于6.6×8.5cm的印迹膜，推荐使用碧云天的Western洗膜盒(9.0×6.0×3.3cm) (FFX050)进行洗涤和孵育；对于裁切后的条形印迹膜，推荐使用碧云天的Western洗膜盒(5格, 14.5×9.8×3.5cm) (FFX055)进行洗涤和孵育。

如果需要，推荐配套使用的BeyoWB™ HRP标记山羊抗小鼠IgG(H+L) (P0946)、BeyoWB™ HRP标记山羊抗兔IgG(H+L) (P0948)以及更多的BeyoGel™ Elite PAGE预制胶(Tris-Gly, 4-20%, 15孔) (P0822)、BeyoWB™ SDS-PAGE上样缓冲液(5X, 无气味) (P0963)、BeyoWB™ PVDF膜(6.6×8.5cm, 0.45μm) (P0965)、BeyoWB™转膜海绵垫(免滤纸) (P0966)、BeyoWB™ SDS-PAGE电泳液(Tris-Gly, 20X) (P0967)、BeyoWB™转膜液(10X) (P0968)、BeyoWB™封闭液(P0950)、BeyoWB™抗体稀释液(P0951)、BeyoWB™洗涤液(P0952/P0953)和BeyoWB™ BeyoECL (P0955)，可以单独向碧云天订购。

个别情况，如果希望获得到更好的Western结果，可适当增加封闭、一抗、二抗孵育及洗涤的时间，并适当优化成像的曝光时间。

BeyoWB™ BeyoECL A液和B液对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。