Luciferase Reporter Gene Assay

产品信息

产品描述

萤火虫萤光素酶（Firefly luciferase）是一种分子量约为61 kDa的蛋白，在ATP、镁离子和氧气存在的条件下，能够催化萤光素（luciferin）氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中会发出波长为560 nm左右的生物荧光，该萤光可通过化学发光仪进行测定。检测原理如图所示：

图1：萤火虫萤光素酶检测原理图

本试剂盒是一闪光型萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂，用于检测裂解液裂解后释放荧光素酶的产物，具有灵敏度高的特点，可以高灵敏的检测萤光素酶在哺乳动物细胞中的表达。建议搭配双萤光素酶报告基因检测裂解组分（Cat NO.11406）一起使用，效果更佳。

产品组分

运输与保存方式

干冰运输。-20℃保存，有效期1年。

不能反复冻融，建议分装-20℃或-80℃保存。

注意事项

1）检测过程中需自备耗材和设备包括如下：PBS、100 μL移液器或者排枪、不透光白色酶标板、Luminometer发光计、多功能酶标仪或者其他能够检测生物发光的仪器；

2）反应温度：酶促反应对温度较为敏感，加样检测前务必将所有试剂平衡至室温（20-25℃）再使用；

3）检测仪器：能检测化学发光的仪器都适用，但由于不同仪器的设置和灵敏度不同，测得的光信号值也会不同；

4）检测设置：Luminescence，350-700 nm，建议检测时间设为2-10 sec；

5）检测板：为防止孔间干扰，推荐使用不透光白色酶标板。黑色酶标板也可用，但因黑色会吸收光信号，可能会降低信号；

6）单管荧光测定仪测定，每个样品与测定试剂混合后到测定前的时间应保持一致；

7）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

实验步骤
 

1）准备裂解产物。

2）按照仪器说明书要求将荧光测定仪打开，设定参数，测定时间为10 sec，测定间隔为2 sec。

3）取20 μL裂解产物加入测量管中（保持每次样品的加样量一致），另外加入100 μL萤火虫萤光素酶检测试剂，震板混匀

2-3次，充分混匀后测定RLU（Relative light unit）。

4）分析数据。

①实验设计：根据不同实验目的，在每个培养板中都应设置对照组、实验组和空白对照组。为了保证实验准确性，理论上每个实验组（包括对照组）都应当减去空白对照组的萤火虫萤光素酶的发光测量值。

a.空白对照组：

背景F：未转染细胞+萤火虫萤光素酶检测试剂。

注：空白对照组的样品量必须与实验样品量相同，包含与实验样品相同的培养基/血清组合，并加上完全相同的检测试剂。

b.实验组：转染细胞经实验化合物处理(即实验组F)。

c.对照组：转染细胞不经处理，用以标准化结果(即对照组F)。

②计算结果：

实验组=实验组F-背景F。

对照组=对照组F-背景F。

表达倍数=实验组/对照组。

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