AAV磁珠纯化试剂盒

通用名称：AAV磁珠纯化试剂盒货 号：FBP24132-8℃冷藏保存，避免冻结。【产品概述】腺相关病毒（Adeno-Associated Virus ，AAV）是Parvovirus科Dependovirus属的无包膜病毒，病毒颗粒直径 18-26 nm，基因组大小约4.7 kb。血清型众多，不同血清型病毒间的宿主特异性和特点有所不同。重组 AAV载体（rAAV）具有低致病性,对宿主免疫原性弱，长期稳定表达，广泛的细胞和组织亲嗜性等优点，经过工程改造后的重组腺相关病毒(rAAV)被视为最有前途的基因治疗载体，已成为体内输送基因疗法的主要平台。AAV病毒颗粒的纯化通常使用碘克沙醇密度梯度离心，操作繁琐，耗时长且回收率低。 AAV磁珠纯化试剂盒可以在大约1h完 成 病 毒 纯 化，适 用 于 多 种 血 清 型，操 作 简 单 、快 速 且 纯 化 率 高，纯 化 所 得 的 病 毒 颗 粒 可 直 接 用 于 下 游 实 验 。【产品优势】1）应用范围广：适用于多种血清型(已针对8和9血清型进行了验证)；2）操作简便：无需进行超离心等繁琐操作，对仪器设备要求低；3）实验周期短：整个纯化过程仅需1h即可搞定；4）磁珠载量大：亲和磁珠结合载量可达^12vg/100μl。【操作流程】1、AAV病毒收集及粗纯（供参考）①收集病毒上清，用PEG沉降过夜，10000rpm离心30min，重悬沉淀；②收集包装细胞沉淀，冻融或研磨裂解细胞，高速离心后取上清；③将①②的病毒上清混合，滤膜过滤去除细胞碎片等，粗纯样本完成，用于后续纯化或-80℃暂存。2、清洗磁珠取适量磁珠置于磁力架上静置1min（100ul磁珠结合约1E+12vg粗纯病毒），吸去上清，加入3倍磁珠体积 Buffer 1吹打重悬，再将悬液置于磁力架上静置1min，弃上清，重复洗涤3次。3、AAV样品孵育和洗杂将粗存AAV样本加到磁珠中，将悬液垂直混匀孵育30min，孵育结束后将离心管置于磁力架上，磁吸2min，将上清液转移到干净的离心管中留样。在离心管中加入与样本等体积的Buffer 1缓冲液进行清洗，充分吹打混匀后磁吸2min，弃去上清，此步骤重复3次，分管收集洗涤液，留样备检。4、 AAV样品洗脱洗杂后的磁珠中加入与样本等体积的Buffer 2，垂直混匀洗脱10min，重复洗脱3次。洗脱后样本立即加Buffer 3，每1mlBuffer 2 加20ul Buffer 3（样本颜色由黄色变为红色即为完成），分管收集洗脱液，鉴定病毒颗粒量及纯度。5、 AAV病毒浓缩和buffer置换将含有AAV病毒的洗脱液转移至超滤浓缩管（30KD）进行Storing buffer置换，并浓缩至所需体积；浓缩病毒使用0.22um滤膜过滤除菌，分装后置于-80℃条件下保存。【实验数据】1）纯化后的AAV纯度测定纯化后样本纯度测定，SDS-PAGE能够确认到以AAV衣壳蛋白 VP1、VP2和VP3 为主的电泳条带。2）纯化后 AAV 病毒的感染力评价纯化后的AAV9-GFP病毒做梯度稀释后，感染293T细胞，病毒活性不受影响。SDS-PAGE 分析感染活性测定【注意事项】1.因受病毒包装效率影响，建议确定病毒包装滴度，在磁珠核载范围内进行纯化；2.粗纯样本建议加核酸酶处理，降低样品粘性和浊度，避免影响结合效率；3. 磁珠在2-8℃保存，避免冻结；4.受到 qPCR定量方法不同的影响，测得的拷贝数和核载效率会有差异，建议可以设置用量梯度验证纯化效率。