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| ♦ 蛋白丝氨酸／苏氨酸磷酸酶活性 ♦ 一些酪氨酸磷酸酶活性
| 概述 蛋白磷酸酶1 (PP1)是一种Mn2+ 依赖型蛋白磷酸酶，对磷酸化的丝氨酸/苏氨酸残基有活性。由330个氨基酸组成，编码于兔骨骼肌中1型蛋白磷酸酶α-亚型催化亚基(1,2)。重组的PP1对磷酸化酪氨酸残基也有部分活性(3,4)。
研究发现，细菌中表达的1型蛋白磷酸酶的α和γ异构体，其催化亚基能使蛋白中的磷酸化酪氨酸残基去磷酸化(3,4)。PP1对磷酸化组氨酸残基也有活性(5)。
| 来源 重组 E. coli 菌株，携带有编码兔骨骼肌PP1基因序列，受 trp-lac 混合启动子(Dr.E.Y.C.Lee惠赠)调控(1，2)。
| 反应条件 1X 蛋白金属磷酸酶（PMP）反应缓冲液 [50 mMHEPES（pH 7.5 @ 25 ℃），100 mM NaCl, 2 mM DTT和 0.01% Brij 35]。加入 1 mM MnCl2 ，30 ℃ 温育。
| 随酶提供的试剂 10X 蛋白金属磷酸酶（PMP） 反应缓冲液
10X MnCl2 （10 mM）
| 比活性 ~25,000 units/mg。
| 分子量 37.5 kDa。
| 品质保证 无蛋白酶活性污染。
| 单位定义 1 单位指在 50 μl 的反应体系中，30 ℃条件下1 分钟内水解 1 nmol 的对硝基苯酚磷酸盐（50 mM，NEB #P0757）所需的酶量。
| 浓度 2,500 units /ml。
| 贮存条件 200 mM NaCl, 50 mM HEPES（pH 7.0 @ 25 ℃）,1 mM MnCl2 ，0 1 mM EGTA，2.5 mM DTT，0.025% Tween 20和 50% 甘油。贮存于 -70 ℃，避免反复冻融。
| 热失活 65°C 1小时。
| 使用注意 建议用 PP1 对蛋白进行去磷酸化的初始反应条件为：
在 50 μl 反应体系中，0.1 units 的 PP1 在 30 分钟内可以除去磷酸化酶的磷酸化丝氨酸/苏氨酸残基的，或者 10 μM（就磷酸浓度而言）的髓磷脂碱蛋白（phospho-MyBP，18.5 KDa）中的，约 100％ 的磷酸基团（0.5 nmol）。 用磷酸化酶激酶对磷酸化酶上的丝氨酸残基进行磷酸化，用磷酸化的磷酸化酶作为底物，来估算PP1 的蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶（PSP）活性。也可用 cAMP 依赖型蛋白激酶磷酸化 MyBP 的丝氨酸/苏氨酸残基，并用磷酸化的 MyBP 作为底物估算酶活。
| 参考文献 (1) Bai, G. et al. (1988) FASEB Journal , 2, 3010–3016.
(2) Zhang, Z. et al. (1992) J. Biol. Chem ., 267, 1484–1490.
(3) Barshevsky, T. and Roberts, R.J. (1997) The NEB Transcript 8, 14.
(4) MacKintosh, C. et al. (1996) FEBS Letters , 397, 225–238.
(5) Kim, Y. et al. (1993) J. Biol. Chem ., 268, 18513–18518.
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