脱硫生物素标记和Pull-Down试剂盒(Magnetic

碧云天研发生产的脱硫生物素标记和Pull-Down试剂盒(Magnetic Beads)，即Desthiobiotinylation and Pull-Down Kit (Magnetic Beads)，是一种新型、高效的基于对感兴趣的蛋白、抗体或其它活性生物分子进行脱硫生物素标记，随后与链霉亲和素磁珠结合，并用于捕获与感兴趣的蛋白、抗体或其它活性生物分子相互作用的靶蛋白或其它结合分子的试剂盒。本试剂盒可以在温和的条件下进行高效洗脱结合的靶蛋白或其它结合分子。本试剂盒可用于研究已知蛋白(也称诱饵蛋白/Known protein/Bait)与拟发现的目标蛋白(也称猎物蛋白/Target protein/Prey)或已知蛋白与DNA、RNA或其它分子之间的相互作用，或用于确认已知的蛋白与蛋白等生物分子间的相互作用。

脱硫生物素(Desthiobiotin)是一种单环无硫的生物素类似物，和生物素相比，与链霉亲和素结合的特异性几乎相等，但亲和力较低(分别为K_d=10^-11 vs. 10^-15M) [1,2]。因此在温和的条件下，可以使用生物素洗脱液竞争性置换与链霉亲和素结合的脱硫生物素标记物。脱硫生物素的这种释放特点有助于减少内源性生物素分子的共纯化，也无需使用严苛的分离条件解离复合物，也可以避免破坏与目标蛋白等分子的结合。当天然蛋白或重组蛋白不适合表达融合标签或需尽可能在天然条件下分离目标蛋白时，脱硫生物素标记和Pull-down就是非常理想的选择[3]。

本试剂盒提供了脱硫生物素标记试剂(Sulfo-NHS-LC-Desthiobiotin)，用于纯化脱硫生物素标记蛋白的脱盐柱(Desalting Column)，用于结合标记蛋白等生物分子上的脱硫生物素标签的链霉亲和素磁珠(Streptavidin Magnetic Beads)，以及生物素洗脱液(Elution Buffer)等试剂。Sulfo-NHS-LC-Desthiobiotin是一种胺反应活性的NHS酯试剂，可以有效地标记已纯化的蛋白样品(Bait)，然后可以使用脱盐柱对脱硫生物素标记的蛋白样品进行纯化。蛋白样品的脱硫生物素标签与链霉亲和素磁珠具有亲和力，在二者高特异性结合后，加入目标蛋白样品(Prey)进行孵育。洗涤去除未结合的组分后，最后使用含游离生物素的洗脱液竞争性洗脱，即可获得脱硫生物素标记蛋白与目标蛋白或其它生物分子的复合物，从而后续就可以通过Western、质谱分析、PCR、DNA测序等分析鉴定结合的目标蛋白或其它生物分子。本产品以蛋白与蛋白相互作用为示例的实验流程和原理图如1所示。

图1. 碧云天脱硫生物素标记和Pull-Down试剂盒(Magnetic Beads) (P0637)以蛋白与蛋白相互作用为示例的实验流程和原理示意图。

本试剂盒标记效率高、标记速度快、操作简单。本试剂盒提供的Sulfo-NHS-LC-Desthiobiotin可高效标记各种带氨基的蛋白、抗体或其它生物分子；使用配套的脱盐柱即Desalting Column (5K MWCO, 5ml)可轻松去除过量的标记试剂并获得大分子量的脱硫生物素标记的生物大分子，而不需要进行透析或者凝胶过滤。

本试剂盒特异性强、洗脱效率高。本试剂盒提供的Streptavidin Magnetic Beads结合量高，可对脱硫生物素标记的样品快速进行分离纯化，且可以使用温和的生物素洗脱液进行竞争性洗脱，洗脱效率高。使用本试剂盒和碧云天脱硫生物素标记和Pull-Down试剂盒(Agarose Resin) (P0635)的结合和洗脱效果请参考图2。

图2. 碧云天脱硫生物素标记和Pull-Down试剂盒(Magnetic Beads) (P0637)和碧云天脱硫生物素标记和Pull-Down试剂盒(Agarose Resin) (P0635)结合和洗脱脱硫生物素标记Mouse IgG的效果图。20µg标记的Mouse IgG分别与50µl Streptavidin Magnetic Beads和50µl Streptavidin Agarose Resin孵育1小时，然后直接SDS-PAGE上样缓冲液煮沸的样品(样品2和4)，以及洗涤后使用生物素洗脱液在37℃摇动洗脱30分钟后获得的样品(样品3和5)的SDS-PAGE电泳考马斯亮蓝染色效果图。图中可见SDS-PAGE上样缓冲液煮沸的样品中含有Streptavidin单体条带(15kDa)。对于Agarose Resin，Pull-down后洗脱获得的蛋白量非常接近Input的量了，说明洗脱非常充分；对于Magnetic Beads，由于物理、化学性状的差别，洗脱效率会略低一些。实际纯化效果会因实验条件、操作等而存在一定差异，本图仅供参考。

本试剂盒小包装可进行5次标记反应(每次约5mg蛋白)和40次沉降(Pull-down)实验(每次50µl)。

Desalting Column 4ºC保存，一年有效；其余-20ºC保存，一年有效。 Elution Buffer 4ºC保存，一年有效；Streptavidin Magnetic Beads 4ºC保存，至少半年有效；Sulfo-NHS-LC-Desthiobiotin 4ºC保存，至少一个月有效。

需自备PBS (C0221A/ST476)、DMSO (ST038/ST2335/ST1276)，需自备6ml层析柱转50ml离心管适配器(FSA011)。

Streptavidin Magnetic Beads需维持pH为6-8，避免高速离心、干燥；请勿长时间将磁珠置于磁场中，否则可能会引起磁珠聚团。

Streptavidin Magnetic Beads使用前要适当充分重悬，即颠倒若干次使磁珠混合均匀，混匀操作须轻柔，不宜剧烈涡旋震荡等，避免蛋白变性等。

标记已知蛋白的溶液里不能含有伯胺基团或胺基离子，推荐使用PBS溶解蛋白。为提升标记效果，需脱硫生物素标记的蛋白的浓度不能太低。

Sulfo-NHS-LC-Desthiobiotin很容易受潮水解失活，保存时一定要注意保持干燥；使用DMSO配制成母液后，可分装后-20℃保存，两个月内有效。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。