Language
特征
- 从粗裂解物中进一步纯化大于95%的蛋白
- 高结合亲和力和高容量
- 非突变或变异条件的资格选择
- 预充即用型基质，适用于任何规模的纯化
- 自动化检测
产品详情
Ni-NTA琼脂糖是一种亲和层析基质，用于纯化带有His标签的重组蛋白。His标签中的组氨酸残基凭借高特异性和亲和力，与固定镍离子配位球中的空位结合。澄清的细胞裂解物被加载到基质上。His标签蛋白与基质结合，其他蛋白则覆盖基质。洗涤后，在非变性或变性条件下在缓冲液中洗脱His标签蛋白。
表现
Ni-NTA Agarose将Ni-NTA与Sepharose CL-6B支链耦合在一起，具有高结合能力，通常结合极少（见图 这种材料具有出色的处理性能，适用于大多数规模的间歇式和常式纯化。Ni-NTA Agarose既可单独提供，也可作为QIA express Kits的纯化试剂盒，这些试剂盒用于从大肠杆菌中高效表达和纯化His标签蛋白的全套试剂盒。
原则
QIA express Ni-NTA 蛋白纯化基于获得专利的 Ni-NTA（次氮基三乙酸镍）树脂含有六个或更多组氨酸残基（或交替）的亲和标记（His 标记）的蛋白选择性。该技术可在非特异性或特异性条件下，从任何表达系统中进一步纯化 His 标签蛋白。NTA 有四个镍离子螯合点，与三个位点可与金属螯合纯化相融合，NTA 与镍的结合更紧密。外部螯合点可防止镍离子浸出，与其他金属螯合纯化相比，它的结合能力更高，制备的蛋白纯度更高。QIA express可用于从任何表达系统中的纯化 His 标签蛋白，包括杆病毒、哺乳动物细胞、酵母和细菌。
程序
他的标签蛋白的纯化分为4个阶段：细胞裂解、结合、洗涤和洗脱使用 QIA express系统纯化重组蛋白与蛋白或6xHis 标签的三维结构无关。这样就可以在非变性或变性条件下，从稀释溶液和粗裂解物中进一步纯化蛋白。强变性剂和洗涤剂可用于高效溶解和纯化受体、膜蛋白和形成体的蛋白。洗涤缓冲液中可加入能高效去纯化的结合基质试剂（见表）。通过添加100–250 mM 咪唑作为竞争剂或降低pH值，在温和条件下洗脱纯化的蛋白。与 His/Ni-NTA 相互作用的试剂
| 变性剂 | 洗涤剂 | 还原剂 | 其他 | 陳 | 使用长期储存 |
|---|---|---|---|---|---|
| 6 M 盐酸古 | 2% Triton X-100 | 20 毫米β-ME | 50% 甘油 | 4 M氯化镁 | 30%的乙醇 |
| 8 M 尿素 | 2% 吐温 20 | 10 毫米 DTT | 20%乙醇 | 5毫摩尔/升氯化钙 | 或 100 mM NaOH |
| 1% 社区支持服务 | 20 毫米 TCEP | 20 mM 咪唑 | 2 米氯化钠 |
应用
Ni-NTA 膳食能可靠地一步纯化适用于以下任何应用的他的标签蛋白：
- 结构和功能研究
- 礦物結構
- 蛋白和蛋白与DNA之间相互检测
- 通过免疫接种产生抗体
- 将完善规模扩大到生产规模
支持数据和数字
使用Ni-NTA蛋白纯化系统进行蛋白纯化。
。规格
| 特征 | 规格 |
|---|---|
| 应用 | 蛋白质组学 |
| 标签 | 6xHis 标签 |
| 珠子尺寸 | 45–165 微米 |
| 特色 | 订单和柱状图 |
| 高效液相色谱 | 否 |
| 加工 | 手动 |
| 支持/矩阵 | 琼脂糖凝胶CL-6B |
| 起始材料 | 细胞裂解物 |
| 规模 | 项目 |
| 结合能力 | 最多 50 mg/ml |
| 重力流或旋转柱 | 重力流 |
| 屈服 | 100 微克 – 100 毫克 |
