试剂盒中单独出售的成分 Amylose 树脂
#E8021V 10 ml . ¥749
#E8021S 15 ml . ¥1,329
#E8021L 100 ml . ¥4,749 抗 MBP 抗血清
#E8030S 0.2 ml . ¥1,329 Factor Xa 蛋白酶
#P8010V 25 μg . ¥299
#P8010S 50 μg . ¥569
#P8010L 250 μg . ¥2,689 MBP5 蛋白
#E8046S 1.0 mg . ¥699
#E8046L 5.0 mg . ¥2,779 MBP5-paramyosin-ΔSal
#E8052S 100 μg . ¥699 pMAL-c5X
#N8108S 10 μg . ¥1,019 pMAL-p5X
#N8109S 10 μg . ¥1,019 | | ♦ 75% 的蛋白可获得高效表达，蛋白产量可达 100 mg/L ♦可在细胞质或周质中表达：周质表达可提高二硫键的形成，促进蛋白质折叠 ♦ MBP 融合表达可以提高蛋白质在大肠杆菌中的可溶性表达 ♦采用麦芽糖温和洗脱：无去污剂或变性剂对蛋白活性的影响 | 概述 pMALTM 系统是一种高效的蛋白融合表达及纯化系统。pMAL 载体含有编码麦芽糖结合蛋白（Maltose Binding Protein, MBP）的大肠杆菌 mal E 基因，其下游的多克隆位点便于目的基因插入，表达N 端带有 MBP 的融合蛋白（1,2,3）。通过“Ptac”强启动子和mal E 翻译起始信号使克隆基因获得高效表达，并利用 MBP 对麦芽糖的特异性结合实现融合蛋白的一步亲和纯化（图1）（4）。
此系统的 pMAL 载体在邻近多克隆位点处含有一段编码特异性蛋白酶识别位点的序列，从而便于纯化后将目的蛋白与 MBP 切割分离（5）。为了实现这个目的，多克隆位点中有一个限制性内切酶识别位点正好位于特异性蛋白酶识别位点处，同时也是目的基因插入的位点。 pMAL 系列载体可从 1 升的培养液中表达出 100mg 的融合蛋白（图2）。大部分情况下，表达出的融合蛋白是可溶的，因为 MBP 已经被证实可提高大肠杆菌中表达蛋白的可溶性（6）。尽管没有一种表达系统适用于所有基因克隆，但 pMAL 蛋白融合表达和纯化系统经证实：在被检测的已知蛋白中，有超过 75％能表达出稳定产量。CurrentProtocols in Molecular Biology（3）中有一章对 pMAL载体的使用作了深入分析。本系统的使用手册可以单独索取，也可以从我公司的网站中 www.neb.com 下载。 | pMAL 蛋白融合表达和纯化系统组成 ♦pMAL-c5X
♦pMAL-p5X
♦Amylose 树脂（结合容量 ~40 mg/柱床体积）
♦ Factor Xa 蛋白酶
♦抗 MBP 抗血清（用于 Western blot 分析）
♦MBP5（SDS-PAGE 电泳用 marker）
♦MBP5-paramyosin-ΔSal（Factor Xa 切割对照蛋白）
♦NEB 表达用大肠杆菌感受态细胞 | 参考文献 （1） Guan, C.et al.（1987） Gene, 67, 21–30.
（2） Maina, C.V.et al.（1988）Gene, 74, 365–373.
（3） Riggs, P.D（1990）.In F.M.Ausebel, R.Brent, R.E.Kingston, D.D.Moore, J.G.Seidman, J.A.Smith and K.Struhl （Eds.）,Current Protocols in Molecular Biology（pp 16.6.1–16.6.10）.New York: John Wiley & Sons, Inc.
（4） Kellerman, O K and Ferenci, T.（1982） In W A Wood（Ed.）, Methods in Enzymology Vol90, （pp 459–463） New York: Academic Press.
（5） LaVallie, E R and McCoy, J.M.（1990） In F.M.Aus ebel, R Brent, R.E.Kingston, D.D.Moore, J.G.Seid man, J.A.Smith and K.Struhl （Eds.）, Current Protocols in Molecular Biology（pp.16.4.1–16.4.17） NewYork: John Wiley & Sons, Inc.
（6） Kapust and Waugh （1999） Protein Science, 8, 1668–1674. | |
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