Language
粒曼ELEMAb™ K-ε-GG抗体琼脂糖珠,用于您的泛素化修饰多肽富集实验!
通过使用特异性微珠结合抗体进行免疫沉淀以富集肽段，并结合液相色谱（LC）和串联质谱（MS/MS），对细胞蛋白质中的翻译后修饰（PTM）位点进行定量分析。这些位点包括磷酸化（ELEMAb™ Phospho） 、泛素化（ ELEMAb™ K-ε-GG） 、乙酰化（ ELEMAb™Acetyl）等。此方法使研究人员能够以高度的特异性和灵敏度分离、鉴定和定量大量的翻译后修饰细胞肽，为细胞和组织样本中的PTMs提供全面概览。
产品试剂清单
| 名称 | 数量 | 保存条件 |
| 1. ELEMAb™ K-ε-GG抗体琼脂糖珠 | 300 μg,600 μL | 4℃保存3个月 |
| 2. IAP 清洗液 | 10XBuffer,1.5mL | 4℃保存 1 年 |
产品使用说明
- 在4℃下，2,000g离心1min，去除ELEMAb™ K-ε-GG抗体琼脂糖珠上清，用预冷的1mL IAP buffer清洗两次，最后离心祛除上清。
- 取0.5/1/2mg冻干多肽（经过蛋白质组学前处理获得的），加入1mL IAP buffer充分混匀溶解，后加入至琼脂糖珠（简称beads）中，在4℃，25 rpm旋转孵育1.5h。
(参考数据：2/4mg多肽量，使用对应30 μg抗体的Agrose珠、0.5/1mg多肽量,使用对应15 μg抗体的Agrose珠。) - 第1次清洗（Wash1）：2,000g离心1min，beads处于底部，吸走上清；加入1mL预冷IAP，颠倒5次，2,000g离心1min，吸走上清。共清洗三次。
- 第2次清洗（Wash2）：2,000g离心1min，吸走上清；加入1mL预冷H2O，颠倒5次，2,000g离心1min，吸走上清，共清洗三次。
- PTM多肽洗脱：将50 μL的洗脱液(0.15%TFA buffer)添加到富集目标PTM的beads中，手指拨动10min。2,000g离心1min，beads沉到底部，吸走上清，将含有纯化目标多肽的上清液转移到干净的EP管中，重复一次，共获得100 μL。
- SPE 脱盐：肽段脱盐(Stage tip C18)流程：(1)活化1:加入50 μL甲醇，6,000 rpm离心1min；(2)活化2:加入50 μL0.2%TFA，6,000 rpm离心1min；(3)上样:将样品加样到Tip头上，6,000 rpm离心1min,收集FT；(4)上样:FT再次加样到SPE板上，6,000 rpm离心1min,上样2次；(5)淋洗:加入50 μL0.2%TFA，6,000 rpm离心1min；6)洗脱:加入30 μL 80%acetonitrile/0.1%TFA,1,000g，离心1min;(7)悬转冻干:1,400 rpm。
- LC-MS/MS 分析：加入20 μL 0.1%FA溶解冻干多肽，8 μL上样，60min梯度DIA-MS鉴定。注:肽段溶解到20 μL上样8μL保证样品可以分析2次。
