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Anti-DYKDDDDK 免疫凝胶
Anti-DYKDDDDK Affinity Gel
本产品4℃运输；保存于4℃，禁止产品冻结，长期存放请保证试剂管竖立向上，保质期24个月。
货号规格
goodYJ108 1 mL
产品简介
goodAnti-DYKDDDDK 免疫凝胶是由高质量的鼠源IgG单克隆抗体与琼脂糖凝胶4B通过共价偶联制备而成，主要用于带有 DYKDDDDK 标签的融合蛋白免疫沉淀(IP)和纯化。
产品参数
| 项目 | 参数 |
| 抗体亚型 | 鼠源IgG单克隆抗体 |
| 基质 | 高度交联的4%琼脂糖微球 |
| 粒径 | 90 μm |
| 结合能力 | 每毫升凝胶可结合的 DYKDDDDK 标签蛋白大于1 mg |
| 凝胶浓度 | 50% |
操作步骤
good◆ 凝胶预处理
good◆gg1. 用移液器轻柔吹打 Anti-DYKDDDDK 免疫凝胶 ，使其充分混悬，迅速吸取10 µL混合液置于新的离心管中；
good◆gg2. 加入500 µL 1×TBS缓冲液(货号：PS121)，用移液器轻柔吹打重悬 Anti-DYKDDDDK 免疫凝胶 ，5,000 rpm离心30 s，吸弃上清；
good◆gg3. 重复步骤2两次；
good◆ 蛋白与凝胶的结合
good◆gg4. 在预处理后的凝胶中加入500 μL细胞裂解液，置于翻转混合仪上孵育(常温2 h，4℃过夜)；
good◆gg5. 将上述混合液5,000 rpm离心30 s，然后把上清液转移到新的离心管中备用(上清液可用于检测 DYKDDDDK 标签蛋白是否存在残留)，原离心管中剩余的即为 蛋白-凝胶复合物 ；
good◆ 漂洗
good◆gg6. 向步骤5所得的 蛋白-凝胶复合物 中加入500 µL 1×TBST缓冲液(货号：PS103)，用移液器轻柔吹打，重新分散凝胶，然后上下翻转使其彻底重悬。5000 rpm离心30 s，吸弃上清；
good◆gg7. 重复步骤6大约三次，直至漂洗后的上清液OD280小于0.05为止；
good◆gg7. 注意：如上清液的OD280仍大于0.05，则可适当增加漂洗次数，延长漂洗时间或提高漂洗液中去垢剂的含量。
good◆ 蛋白洗脱
good◆ 根据下游不同的应用选择相应的洗脱方法：免疫沉淀可直接进行步骤8和9；蛋白纯化则可根据后续实验，选择多肽竞争性洗脱(步骤10和11)或低pH洗脱(步骤12和13)。
good◆g◎ 变性洗脱(适用于免疫沉淀)
good◆gg8. 如需直接检测目的蛋白，则在步骤7漂洗过的 蛋白-凝胶复合物 中加入50 μL 1×蛋白上样缓冲液(货号：LT101)，煮沸5 min；
good◆gg9. 取上清进行SDS-PAGE检测；
good◆g◎ Poly DYKDDDDK 多肽竞争性洗脱(适用于蛋白纯化)
good◆g10. 将5倍凝胶体积的1×TBS(含有200~1000 µg/mL Poly DYKDDDDK 多肽)加入步骤7的产物中，置于翻转混合仪上孵育(4℃ 2 h)，为提高洗脱效率，可适当延长孵育时间；
good◆g11. 将步骤10得到的产物进行离心(5000 rpm，30 s)，将含有目的蛋白的上清液转移到新的离心管中。凝胶如需重复使用，需用0.1 M Glycine-HCl缓冲液(pH 3.0)进行清洗后再回收；
good◆g◎ 低pH洗脱(适用于蛋白纯化)
good◆g12. 将5倍凝胶体积的0.1 M Glycine-HCl缓冲液(pH 3.0)加入步骤7的产物中，置于翻转混合仪上孵育洗脱5 min，洗脱时间不得超过20 min；
good◆g13. 将步骤12得到的产物进行离心(5000 rpm，30 s)，将洗脱产物立即加入1 M Tris(pH 8.0)进行中和，调节pH直至中性。
注意事项
good1. Anti-DYKDDDDK 免疫凝胶应保存在储存溶液中，防止干燥；
good2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；
good3. 本产品仅限科研使用。
