【产品介绍】GFP beads 是一种绿色荧光蛋白结合蛋白偶联的琼脂糖，能够高效特异地结合绿色荧光蛋白GFP，其结合效率可高达 4 ug/10ul，相比于直接运用 GFP 抗体和 proteinA/G 偶联的 Beads，其效率要高很多。该Beads可运用于两个蛋白或者多个蛋白的互作分析（Co-IP），蛋白和DNA互作（DNA pull down 或者 CHIP），蛋白和 RNA 互作（RIP）还可以用作质谱分析以及酶活分析。GFP beads产品不仅能够高效识别结合各种 GFP,比如Egfp、ACGFP，wtGFP, GFP S65T，TagGFP等，还能识别 CFP、YFP、BFP 等荧光蛋白。产品结合效率非常高，比常规结合方式——抗体+beads的方式高出很多（如图一）。GFP beads 适应样品范围广：适用于组织，器官，细胞，植物材料，细菌，酵母，总之，有GFP 蛋白的样品该 beads 都能够直接识别结合。使用该产品做 co-ip 方法：1. 轻轻上下颠倒 GFP-beads，使得 beads 充分混匀，用剪过的枪头吸出所需体积量的 beads 至 1.5ml 的离心管中。一个样品大约 25-30ul beads。2. 加入 1ml washing buffer，轻轻上下颠倒清洗 beads，然后 800g，4℃离心 5min，吸掉上清液。如此重复三遍。3. 将转染后的细胞弃掉上清，用 PBS 清洗一遍，然后胰酶重悬（为重悬充分，加入胰酶后 37℃ 孵育 5min）。枪头轻轻重悬细胞转移至 1.5ml 离心管，800g 离心 5min，弃上清。4. 利用以下 lysis buffer 裂解（10 mM Tris/Cl pH 7.5; 150 mM NaCl; 0.5 mM EDTA; 0.5% NP-40；1xcocktail）。枪头充分吹吸至细胞完全裂解，冰浴 10min。5. 高速离心后，将上清液吸出，加入 30 微升 GFP-BEADS 孵育，4℃垂直混匀 2-3h（也可 4℃过夜）。推荐 30ul beads 结合至少两个 6cm 皿细胞表达量的蛋白，在蛋白表达量低的情况下可多收集样本量保证样品饱和 beads。6. 800g，4℃离心 5min，吸掉上清液，（可取一定量上清液作为对照），加入 1ml 预冷的 washing buffer，上下颠倒清洗 beads，然后 800g，4℃离心 5min。重复 3-5 遍。7. 充分除去上清，加入 30-50 微升 4x sample buffer，混匀后 100℃煮 10min。如需蛋白不变性或非变性则需 50-100 微升 200 毫摩尔 PH2.5 的甘氨酸溶液洗脱目的蛋白，可在 4℃条件下垂直混匀 10min，800g 离心，将上清转移至新离心管，加入 5-10 微升中和 buffer 1 M Tris pH 10.4 (四度下的 PH）。8. 13000rpm 离心 10min，上清液可用 western blot 鉴定。如果是质谱检测，wb 后切胶酶解，纯化后上机检测。
 图一 |
推荐 washing buffer：10 mM Tris/Cl pH 7.5; 150 mM NaCl; 0.5 mM EDTA。 【质量保证】GFP beads 的每批产品实行严格质量检验，并进行多次反复实验验证，以确保产品质量。请用户使用前务必认真阅读本手册。 【使用限制】本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时，本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。在所有情况下，本公司对此产品所承担的责任，仅限于此产品的价值本身。
Language
