纯化线粒体溶解试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

纯化线粒体溶解试剂是一种旨在通过化学裂解处理，使线粒体膜结构破坏而获得线粒体内的活性蛋白酶系统的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种线粒体（动物、人体、植物、昆虫等）的内容物预制备。可以被用于细胞凋亡、信号传递、古生物、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景

线粒体是细胞中重要的细胞器，其主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。线粒体中含有丰富的细胞色素氧化酶系统、细胞凋亡相关蛋白和独立的核外 DNA。通过线粒体溶解，可以进行相关蛋白的独立分析。

产品内容

溶解液（Reagent A） 毫升
上样液（Reagent B） 毫升
产品说明书 1 份

保存方式

保存在 4℃冰箱里，有效保证 6 月

用户自备

线粒体粗提分离试剂盒（YD10006）：用于获得线粒体成组分
1.5 毫升离心管：用于样品操作的容器微型台式离心机：用于样品制备
涡旋震荡仪：用于混匀

实验步骤

1. 从－70℃冰箱里取出线粒体颗粒样品，置入冰槽里
2. （选择步骤）如果线粒体样品不是颗粒状态，而是液体状态且容积过大，放进 4℃微型台式离心机离心 20 分钟，离心速度为 16000g（或 13000RPM，例如 EPPENDORF 5415）
3. （选择步骤）小心抽去上清液
4. 加入xx 微升 溶解液（Reagent A）到线粒体颗粒样品中
5. 涡旋震荡 15 秒
6. 置入冰槽中孵育 15 分钟
7. 涡旋震荡 60 秒

8. 4℃微型台式离心机离心 2 分钟，离心速度为 16000g（或 13000RPM，例如 EPPENDORF 5415）
9. 小心移取上清液到新的 1.5 毫升离心管――此为所有可溶性线粒体蛋白系统10．若暂时不予后续处理，保存在－20℃冰箱里或长期保存，放进-70℃冰箱里11．继续进行下列操作：

操作一、可溶性线粒体蛋白电泳

1. 移取xx 微升上清液到新的 1.5 毫升离心管，
2. 加入xx 微升 上样液（Reagent B）
3. 涡旋震荡 15 秒
4. 放进微型台式离心机离心 10 秒，速度为 2000RPM
5. 煮沸 5 分钟
6. 上样，进行电泳操作和西方杂交

操作二、线粒体总蛋白定量检测

1） 移取 10 微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒－
YD30030.1）

注意事项

1. 本产品为 20 次操作
2. 整个操作须在 4℃条件下进行
3. 操作时须戴手套
4. 建议使用 10⁸细胞或 200 毫克组织获得的线粒体量
5. 如果线粒体样品的液体容量少于 50 微升，可直接加入 100 微升 溶解液（Reagent A）进行操作，无需再次离心
6. 如果需检测不溶性线粒体蛋白，可保留线粒体溶解后的沉淀物，直接加入 10 微升 上样液

（Reagent B）和 10 微升用户自备的无离子水，然后继续操作一的步骤 3 至 6

7. 本公司提供系列线粒体试剂产品

质量标准

1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定无蛋白酶污染
3. 本产品经鉴定蛋白萃取产量和纯化程度高

使用承诺

上海羽哚生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定， 保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。