Amplex Red甘油检测试剂盒

碧云天研发的Amplex Red甘油检测试剂盒(Amplex Red Glycerol Assay Kit)是一种基于探针Amplex Red，利用荧光或吸光度检测，快速、高灵敏地对血清、血浆、组织或细胞样品、尿液、生物体液、组织或细胞培养上清等样品中甘油含量进行检测的试剂盒。本试剂盒仅检测游离甘油的含量，不检测甘油三酯中的甘油含量。

本试剂盒检测灵敏度高，线性范围宽，样品用量少。本试剂盒采用吸光度检测时，在20-500μM浓度范围内有良好的线性关系；采用荧光检测时，在2-200μM浓度范围内有良好的线性关系。使用本试剂盒进行荧光法检测时，检测灵敏度会显著提高，可以使用更少量的样品。

本试剂盒检测方法灵活，检测速度快，适用范围广。本试剂盒不仅可以用荧光检测，也可以用吸光度检测，荧光检测比吸光度检测灵敏度约高10倍。整个检测过程约30分钟即可完成。本试剂盒可用于小鼠、大鼠、人等的血清、血浆、组织或细胞样品、尿液、组织或细胞培养上清等样品的检测。本试剂盒不仅适合少量样本的检测，也非常适合高通量筛选(High-throughput screening)的自动化操作系统。

本试剂盒特异性高。本试剂盒可以排除样品中甘油-3-磷酸(Glycerol-3-phosphate)和过氧化氢(H2O2)对于甘油检测的干扰，使检测结果更加准确。

甘油(Glycerol, Glycerin or Glycerine)，又称丙三醇，是一种无色、无臭、味甜的澄明黏稠液体。甘油的分子式为C3H8O3，分子量为92.09。甘油的化学结构与碳水化合物不同，不属于同一类物质。每克甘油完全氧化可产生4千卡热量，甘油经人体吸收后通常不会改变血糖和胰岛素水平。甘油是食品加工业中通常使用的甜味剂和保湿剂，大多出现在运动食品和代乳品中。由于甘油可以增加人体组织中的水分含量，所以可以增强高热环境下人体的运动能力。甘油被广泛用于食品、饮料、溶剂、药物和化妆品等的生产，因此其定量在研发中重要意义[1]。

甘油是甘油三酯的主要组成部分，是脂肪最重要的储存方式，也是能量代谢的氧化和合成过程中产生的一种重要的代谢物。当人体摄入脂肪时，大部分脂肪经胆汁乳化成小颗粒，胰腺和小肠内分泌的脂肪酶将脂肪里的脂肪酸水解成游离脂肪酸和甘油单酯。甘油单脂和长链脂肪酸被吸收后，在小肠细胞中重新合成甘油三酯。在生理条件下，甘油三酯通过脂酶(Lipolysis)的水解作用生成甘油和游离脂肪酸(Free fatty acids, FFA)并释放进入血液。生成的甘油不能像脂肪酸一样被脂肪组织再次吸收利用，所以血液中的甘油和游离脂肪酸水平都是非常有效的衡量脂解水平的重要指标，也是很多相关药物研发过程中重要的指标[2-3]。

本试剂盒中的Amplex Red是一种对H2O2高度敏感的荧光探针。在辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase, HRP)存在的情况下，Amplex Red能与H2O2 1:1反应，产生强烈的红色荧光物质试卤灵(Resorufin)。试卤灵的最大激发波长为571nm，最大发射波长为585nm，并且在激发波长处有很强的可见光吸收。因此本试剂盒可以用荧光和吸光度两种方法来进行检测。

本试剂盒的检测原理如图1所示。在ATP存在的情况下，甘油(Glycerol)被甘油激酶(Glycerol kinase, GK)磷酸化为甘油-3-磷酸(Glycerol-3-phosphate)，生成的甘油-3-磷酸再在甘油磷酸氧化酶(Glycerol phosphate oxidase, GPO)的作用下和氧气发生氧化反应生成磷酸二羟丙`酮(Dihydroxyacet one phosphate, DHAP)和H2O2，再通过检测H2O2与Amplex Red的反应产物试卤灵的荧光强度或吸光度来最终检测甘油的含量。试卤灵的荧光强度和吸光度与样品中甘油的含量成正比。

图1.碧云天Amplex Red甘油检测试剂盒(S0223)检测甘油的原理图。

本试剂盒提供了甘油标准溶液，可以通过设置标准曲线，从而计算出样品中的甘油含量。本试剂盒对甘油标准品的检测效果参考图2。

图2.碧云天Amplex Red甘油检测试剂盒(S0223)检测甘油的标准曲线。左图为吸光度检测，右图为荧光检测。图中为37ºC避光反应60分钟的检测数据，反应30分钟数值会略低。实测数据会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

按照使用说明操作，本试剂盒小包装可以进行100次检测，中包装可以进行500次检测。

包装清单：

保存条件：

-20ºC保存，一年有效。其中Amplex Red、酶混合物须避光保存。