Amplex Red甘油三酯检测试剂盒

碧云天研发的Amplex Red甘油三酯检测试剂盒(Amplex Red Triglyceride Assay Kit, or Amplex Red TG Assay Kit)是一种基于探针Amplex Red，利用荧光或吸光度检测，快速、高灵敏地对血清、血浆、组织或细胞样品、尿液、生物体液、以及细胞或组织培养上清样品中甘油三酯含量进行检测的试剂盒。

本试剂盒检测灵敏度高，线性范围宽，样品用量少。本试剂盒采用吸光度法检测时，在0.2-10mM范围内有良好的线性关系；采用荧光法检测时，在0.02-5mM范围内有良好的线性关系。使用本试剂盒进行吸光度法检测时灵敏度和常规的吸光度法临床用甘油三酯检测试剂盒的灵敏度相近或略高，使用本试剂盒进行荧光法检测时，检测灵敏度会显著提高，可以使用更少量的样品。

本试剂盒检测方法灵活，检测速度快，适用范围广。本试剂盒不仅可以用荧光检测，也可以用吸光度检测，荧光检测比吸光度检测灵敏度约高5-10倍。整个检测过程约90分钟即可完成。本试剂盒可用于大鼠、小鼠、人等的血清、血浆、组织或细胞样品、尿液、生物体液、以及细胞或组织培养上清等样品的检测。本试剂盒不仅适合少量样本的检测，也非常适合高通量筛选(High-throughput screening)的自动化操作系统。

本试剂盒特异性高。本试剂盒可以排除样品中甘油、甘油-3-磷酸(Glycerol-3-phosphate)和过氧化氢(H2O2)对于甘油三酯检测的干扰，使检测结果更加准确。

甘油三酯(Triglyceride, Triacylglycerol, or Triacylglyceride, 简称TG或TAG)又称中性脂肪、甘油三酸酯、三酸甘油酯或三酰甘油，是由3个分子的长链脂肪酸(Long-chain fatty acids)和1个分子的甘油(Glycerol)酯化形成的脂肪分子，是体内能量的重要来源。甘油三酯是人体内含量最多的脂类，约占人体脂类的95%，大部分组织均可以利用甘油三酯分解产物供给能量，同时肝脏、脂肪等组织还可以进行甘油三酯的合成，在脂肪等组织中贮存。甘油三酯是植物油、动物脂肪、低密度脂蛋白(Low-density lipoprotein, LDL)、极低密度脂蛋白(Very low-density lipoprotein, VLDL)中的主要成分，在脂肪酸的运输过程中起重要作用，也是能量的重要来源。甘油三酯在一系列脂肪酶的作用下，分解生成甘油和脂肪酸，并释放进入血液供其它组织利用。

甘油三酯由甘油与脂肪酸酯化而成，是血脂的主要组成部分，也是机体重要的供能物质。食物中的甘油三酯在肠道经胰脂酶消化分解，吸收后重新酯化为甘油三酯，经淋巴系统进入血液。肝脏是合成甘油三酯的主要场所，脂肪组织是最大的甘油三酯储存库[1]。高甘油三酯和高胆固醇血症是临床最常见的高脂血症，已证实与动脉粥样硬化、心肌梗死、脑中风、高血压、糖尿病、肥胖等多种疾病有关[2]。除了血浆甘油三酯外，组织、细胞中的甘油三酯聚集增加，也与肥胖、脂肪肝、胰岛素抵抗、能量代谢异常等多种病理过程密切相关[3]。在病理条件下，各种组织细胞合成和储存的甘油三酯显著增加。血液和组织细胞中甘油三酯含量是生物、医学研究常用的生化指标。

本试剂盒中的Amplex Red是一种对H2O2高度敏感的荧光探针。在辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase, HRP)存在的情况下，Amplex Red能与H2O2 1:1反应，产生强烈的红色荧光物质试卤灵(Resorufin)。试卤灵的最大激发波长为571nm，最大发射波长为585nm，并且在激发波长处有很强的可见光吸收。因此本试剂盒可以用荧光和吸光度两种方法来进行检测。

本试剂盒的检测原理如图1所示。甘油三酯(Triglyceride)被脂蛋白脂肪酶(Lipoprotein lipase, LPL)水解成甘油(Glycerol)和脂肪酸(Fatty acids)，生成的甘油在ATP和甘油激酶(Glycerol kinase, GK)的作用下磷酸化为甘油-3-磷酸(Glycerol-3-phosphate)和ADP，生成的甘油-3-磷酸再在甘油磷酸氧化酶(Glycerol phosphate oxidase, GPO)的作用下和氧气发生氧化反应产生磷酸二羟丙`酮(Dihydroxya cetone phosphate, DHAP)和H2O2，再通过检测H2O2与Amplex Red的反应产物试卤灵的荧光强度或吸光度来最终检测甘油三酯的含量。试卤灵的荧光强度和吸光度与样品中甘油三酯的含量成正比。

图1.碧云天Amplex Red甘油三酯检测试剂盒(S0219)检测甘油三酯的原理图。

本试剂盒提供了甘油三酯标准溶液，可以通过设置标准曲线，从而计算出样品中的甘油三酯含量。本试剂盒对甘油三酯标准品的检测效果参考图2。

图2.碧云天Amplex Red甘油三酯检测试剂盒(S0219)检测甘油三酯的标准曲线。左图为吸光度检测，右图为荧光检测。本试剂盒采用吸光度法检测时，在0.2-10mM范围内有良好的线性关系；采用荧光法检测时，在0.02-5mM范围内有良好的线性关系。实测数据会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

按照使用说明，本试剂盒小包装可以进行100次检测，中包装可以进行500次检测。

包装清单：

保存条件：

-20ºC保存，一年有效。其中Amplex Red、酶混合物须避光保存。

注意事项：

本试剂盒如果用于细胞或组织样品的检测，须自备异丙醇。用异丙醇制备的细胞或组织样品，可以用于甘油三酯、甘油、游离脂肪酸、胆固醇和胆固醇酯的检测。当样品为细胞或组织的异丙醇抽提物或溶解物时，应使用甘油三酯检测缓冲液(后续简称检测缓冲液)至少稀释5倍，使50μl样品中的异丙醇含量不高于20%，即相当于总的100μl检测体系中异丙醇的含量不高于10%，此时本试剂盒才能正常工作。

为减少稀释液产生的荧光背景带来的误差，标准品的稀释液应该根据样品制备所用的溶液来定。当样品为异丙醇制备的细胞或组织样品时，可以使用和样品中异丙醇含量相同的检测缓冲液稀释；当样品为血液等其它样品时，宜使用检测缓冲液稀释。

Amplex Red在空气中不太稳定，开启后应尽快使用，且在使用过程中一定要注意适当避光。

Amplex Red的反应产物在还原剂的存在下会很不稳定，因此最终反应体系中的二硫苏糖醇(DTT)、β-巯基乙醇或类似还原剂的浓度应低于10μM。

请确保反应体系的pH值在7-8之间，否则会影响Amplex Red的稳定性和荧光值。

检测缓冲液需要完全解冻并平衡至室温后再使用，否则会影响检测结果。其它试剂(除甘油三酯标准溶液(50mM)外)使用时应在冰上进行。

甘油三酯标准溶液如果有油脂析出会影响后续反应，需要在50-80ºC水浴孵育5-20分钟，使甘油三酯标准溶液完全溶解。甘油三酯标准溶液配制在无水乙醇中，由于无水乙醇容易挥发，水浴溶解过程中请注意密封。

血清、血浆等样品如果在4ºC保存，保存时间不得超过2周，否则会影响检测结果的准确性。通常血清样品宜在-20ºC保存，-80ºC保存更佳。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。