RhoA G-LISA活化检测试剂盒（比色法）

背景知识：小G蛋白(Small G Protein)因分子量只有20—30KD而得名，同时具有GTP酶活性，小G蛋白家族成员在细胞信号通路中发挥分子开关的功能，Rho蛋白对细胞骨架网络的构成发挥调节作用；Ras蛋白主要参与细胞增殖和信号转导；Rab蛋白则参与调控细胞内膜交通（membrane traffic）。小G蛋白的共同特点是，当结合了GTP时即成为活化形式，这时可作用于下游分子使之活化，而当GTP水解成为GDP时（自身为GTP酶）则恢复到非活化状态，研究GTP酶（GTPase）的活化调控机制具有广泛而深远的生物学意义。

传统检测Rho 蛋白活化水平的方法主要为pull-down检测。pull-down法往往存在耗时长、需要样本量大、不太适合高通量检测等缺点。为克服传统方法这些方面的缺点，Cytoskeleton公司开发了新一代的G-LISA™检测方法，用于快速简便地检测GTP酶活化水平。


RhoA G-LISA活化检测试剂盒（比色法）检测原理及步骤



1.首先将效应蛋白的受体结合域（RBD）包被96孔板；
2.样本中GTP(活化状态)结合形式的蛋白分子则可结合到板上，而GDP(无活性状态)结合形式蛋白则不结合；
3.洗去未结合的蛋白；
4.然后依次加入特异性的一抗和HRP-二抗进行孵育结合；
5.最后利用合适的酶底物OPD或化学发光试剂显色。
 

传统Pull down法和G-LISA法的比较

 

	传统Pull down法	G-LISA
原理	用包被效应蛋白的亲和磁珠选择性的结合有活性的GTPase，用western blot检测信号	用包被效应蛋白的96孔板选择性的结合有活性的GTPase 用ELISA检测信号
实验设备	SDS-PAGE、Western blot相关仪器	ELISA相关仪器
上样量	300 - 2000 µg per assay	5 - 50 µg per assay
样品数量	Up to 10 samples	Up to 96 samples (or more)
结果定量	WB具有很窄的线性范围。此外，样品的多次操作也会导致某种程度上的变异分析。	提供精确定量的数字读数
反应时间	10-12h	＜3h
对比视频网址	https://www.cytoskeleton.com/activationassayvideo

 

G-LISA法对比传统的pull down，主要有操作简便、上样量少、可同时检测多个样本、反应时间短、定量结果准确、与小鼠、大鼠和人的组织和细胞兼容等优势。  

小G蛋白活化检测试剂盒已发表精彩文章鉴赏：

1. Howe and Addison, 2012. RhoB controls endothelial cell morphogenesis in part via negative regulation of RhoA. Vascular Cell. v 4, p 1.
2. Zhou et al., 2012. HSV-mediated gene transfer of C3 transferase inhibits Rho to promote axonal regeneration. Exp. Neurol. http://dx.doi.org/10.1016/j.expneurol.2012.06.016.
3. Khan et al. (2011). Geranylgeranyl transferase type I (GGTase-I) deficiency hyperactivates macrophages and induces erosive arthritis in mice. J Clin Invest doi:10.1172/JCI43758.
4. Yi H, Tao L, Feng TX, Ken C, Ming LL. (2010). Effects of ischemic preconditioning on vascular reactivity and calcium sensitivity after hemorrhagic shock and their relationship to the Rho A-Rho-kinase pathway in rats. J Cardiovasc Pharmacol.

 Cytoskeleton公司成立于1993年，专注于生物化学和细胞过程研究中的纯化蛋白和便捷试剂盒开发与生产。公司提供药物筛选、信号转导、蛋白质转录后修饰（PTM）、细胞骨架研究相关的系列试剂盒和产品，尤其以细胞骨架相关研究见长，既能满足于样品较少的科学研究，也可以用于小规模筛选研究和高通量大规模筛选研究。

目前主要的产品有340余种，其产品主要覆盖肌动蛋白，微管蛋白，马达蛋白，小G蛋白，细胞外基质，活细胞成像等相关领域，提供对应的蛋白质，抗体，检测与分析试剂盒，并且产品线还在不断的扩大中。此外，公司还提供微管蛋白，肌动蛋白，小G蛋白，GAPs，GEFs等现有产品的药物筛选服务。

艾美捷科技与国内外优秀的生物试剂供应商保持着密切的合作关系，目前已成为众多国际知名品牌的中国总代理或一级代理，主要包括：Abbkine、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Alomone Labs、Biovision、Biosensis、Cayman Chemical、Caisson Labs、Cytoskeleton、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、ProSpec、PhytoAB、Norgen Biotek、Mabtech、iRegene、StressMarq、Trevigen、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological、Mabtech、Solis BioDyne等，可以在第一时间为用户提供最前沿的专业资讯、完备的产品及物流服务。