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多糖多酚植物总 RNA 提取试剂盒（gDNA 过滤器）
Polysaccharide/polyphenol Plant Total RNA Mini Kit
目录号：91318
产品内容
产品成份 | 91318-50（50 次） |
裂解液 PRL | 50 ml |
糖酚去除剂 PAD | 5 ml |
裂解液 PRL Plus | 25 ml |
去蛋白液 RW1 | 40 ml |
漂洗液 RW | 10 ml（需加入指定量无水乙醇） |
RNase-Free H2O | 10 ml |
gDNA 过滤器和收集管 | 50 套 |
RNA 吸附柱和收集管 | 50 套 |
RNase-Free 1.5ml 离心管 | 50 支 |
RNase-Free 2.0 ml 液氮研磨管 | 50 支 |
自备试剂
无水乙醇
保存条件
室温（15 ~ 25℃）下，存放 12 个月，不影响使用效果。
产品简介
适用于快速提取各种植物根、茎、叶、花的总RNA，采用gDNA过滤器，高效滤除gDNA，得到的总RNA可直接用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通转录组测序、RACE等。
成功案例：棉花、海棠、黑加仑、烟草、拟南芥、虎杖、大豆、草莓、冬青、月季花雌蕊、蔷薇、沙棘、冬枣、芦荟、仙人掌、报春花、水稻、玉米、唐菖蒲、樱桃、白玉兰、毛白杨、樱花、葡萄、百合花、百合叶子雌蕊雄蕊、紫菜、绿藻、香蕉、水仙花、青花菜、地被菊、苹果、梅花、番茄、石斛、毛桃、苎麻、慈姑、葛根、甘肃桃、玫瑰花、槟榔果、甜糖菊、硅藻、牡丹、胡杨、油桐果、梨子皮、板栗花序、青皮云杉、红树根、铁线蕨、黄瓜、小麦、番木瓜、甘薯、紫薯、油松、油茶、马尾松、芜菁、毛果杨、木薯、大叶落地生根、山杏、旱柳、桉树、琵琶花果、麻风树，沙生槐、荞麦...
产品特点
1. 无毒：免氯仿、免β-巯基乙醇！
2. 高质：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！
3. 高效：提取全过程仅需 20min！
操作步骤
第一次使用前请先在漂洗液 RW 中加入指定量无水乙醇，详见瓶身的标签。
提示：所有离心步骤必须在室温（15 ~37℃）下进行。
1. 材料处理：
a．吸取 500 μl 裂解液 PRL，转入 1.5 ml 离心管中，再加入50 μl糖酚去除剂PAD，混匀备用。
注意：糖酚去除剂 PAD 是提取多糖、多酚、次级代谢产物多、色素含量丰富的困难样品不可或缺的成分。对于幼嫩的农作物叶片等简单样本，不加糖酚去除剂 PAD，RNA 的产量可能会提高一些。
b．液氮中研磨植物组织成细粉，取≤50 mg 细粉转入上述装有 PRL 裂解液的离心管中, 剧烈涡旋震荡 30 sec，充分混匀。
冬天气温低， 37℃摇床放置 3 min，可增强裂解效果，提高产量
c．将裂解物 13,000 rpm 离心 5 ~10 min，沉淀不能裂解的碎片。
注意：使用 1ml 裂解液 PRL 和 100 μl 糖酚去除剂去裂解 100 mg 样品，RNA 产量会翻倍。
2. 小心吸取上清（一般 480 μl，注意不要吸到沉淀）转入一个新的 1.5 ml离心管，加入0.5倍体积（一般 240 μl）的无水乙醇, 吹打混匀。
3. 每次转移≤750 μl 上清混合液至 gDNA 过滤器中，13,000 rpm 离心2 min，倒弃滤液。此时，绝大部分gDNA 被滤除，RNA 和少量 gDNA残留被吸附在膜上，重复此过程，直到混合液全部转入gDNA 过滤器。
4. 取出步骤3的gDNA 过滤器，放入一个新的 2 ml 离心管中，加入 500μl裂解液 PRL Plus，13,000 rpm 离心1 min，收集滤液（RNA 在滤液中），向滤液中加入 250μl 无水乙醇，吹打混匀。
5. 将滤液混合物加入 RNA 吸附柱中，13,000 rpm 离心 2 min，此时，RNA被吸附在膜上，倒弃滤液。
6. 加入 700 μl 去蛋白液 RW1，室温放置 1min，13,000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。
7. 加入 500 μl 漂洗液 RW，13,000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。
8. 重复步骤 7。
9. 将 RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 离心 2 min，除去膜上残留的乙醇。
10. 取出 RNA 吸附柱，放入 RNase-free1.5 ml 离心管中，向 RNA 吸附膜的中央悬空滴加30~50μl的RNase-free H2O，室温放置 1 min，13,000 rpm 离心 1 min。
11. 提取的总RNA，可直接用于下游实验，或于-70℃保存，以免降解。
附录：
一、液氮研磨（自动研磨仪）:
a. 在 2.0 ml 液氮研磨管中放入 3 mm 钢珠 3 粒，放进≤50 mg 样本，投入液氮中预冷。把研磨模块也丢到液氮中预冷，直到没有气泡冒出视为预冷完毕。
b. 把预冷好的离心管插入研磨模块中，放进研磨仪，设置 55 个频率，震荡 30~60 sec。（以北京赫得京 N9548 为例）
c. 研磨完成后，马上加 500μl 裂解液 PRL 和 50 μl 糖分去除剂 PAD，剧烈涡旋30 sec。
d. 将裂解物13,000 rpm 离心5~10 min，沉淀不能裂解的碎片。
二、免液氮直接研磨（自动研磨仪）——适用于新鲜样本
a. 在2.0 ml液氮研磨管中加入5 mm 钢珠1粒，加1ml裂解液 PRL和100μl PAD，放进≤100 mg 样本，设置 60 个频率，震荡 2 min。
b. 将裂解物 13,000 rpm 离心 5~10 min，沉淀不能裂解的碎片。
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