Click-&-Go® Plus 555 OPP-Click

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产品名称：Click-&-Go® Plus 405 OPP-Click-&-Go® Plus 555 OPP

产品货号：CCT-1494

产品规格：1Kit

Click-&-Go® Plus 555 OPP蛋白质合成检测试剂盒基于普鲁霉素的炔基类似物O-丙炔基-普鲁霉素（OPP），能够对细胞和动物中的新生蛋白质进行灵敏而非放射性的化学成像和亲和纯化。OPP是普鲁霉素的类似物，含有一个末端炔基，进入核糖体的受体位点并嵌入新生多肽链中。OPP与新生多肽链形成共价结合物，这些结合物会被蛋白酶体快速降解，并可以通过铜(I)-催化偶氮-炔基环加成反应可视化。与蛋氨酸类似物不同，OPP不需要蛋氨酸无条件，独特之处在于可以用于标记和检测整个生物体内的新生蛋白质。这种策略在体内成像蛋白质合成和识别在各种生理和病理条件下合成的蛋白质具有广泛的适用性。

许多蛋白质的合成在翻译水平上受到严格控制，并且在细胞生长和增殖、信号传导、分化或死亡等基本过程中发挥重要作用。允许成像和鉴定新生蛋白质的方法对于在空间和时间上，特别是在整个生物体中解剖翻译的调节是至关重要的。虽然蛋白质合成是一个保守的和必要的细胞功能，它往往是调节细胞类型特异性的方式来影响细胞的命运，生长和稳态。用于测量蛋白质合成的大多数方法依赖于用放射性标记的氨基酸、稳定同位素标记的氨基酸、生物正交非规范氨基酸标记（L-叠氮基高丙氨酸或高炔丙基甘氨酸或其组合）代谢标记大量细胞。由于这些方法通常依赖于专门的生长条件，因此它们在很大程度上限于酵母、细菌和细胞系。应用这些技术研究哺乳动物系统中的蛋白质合成em in vivo/em具有挑战性。O-炔丙基嘌呤霉素（O-propargyl-puromycin，简写为Pu）是一种含有末端炔基的嘌呤霉素类似物，它的使用促进了体内单个细胞内蛋白质合成的定量。核糖体进入核糖体的受体位点并结合到新生多肽链中。与上述传统方法不同的是，β-内酰胺酶不是氨基酸类似物;因此，β-内酰胺酶可以直接添加到完全培养基中的细胞中（即，含甲硫氨酸）或用于检测体内EM/EM蛋白合成。它也可以用于对培养基交换或在无甲硫氨酸培养基中孵育敏感的细胞系。高细胞渗透性和信噪比的结合使其成为研究各种细胞类型和条件下新生蛋白质组的理想候选化合物。该试剂盒包含使用橙色荧光AZDye 555 Azide Plus（Alexa Fluor® 555等效物）和用于核染色的蓝色荧光Hoechst 33342染料检测所需的所有组件。nbsp;使用96孔板，提供足够量的试剂用于25个盖玻片或250个威尔斯孔的成像。The use of O-propargyl-puromycin (OPP), an analog of puromycin that contains a terminal alkyne group, has facilitated the quantification of protein synthesis within individual cells in vivo. OPP enters the acceptor site of ribosomes and incorporates into nascent polypeptide chains. Unlike traditional methods mentioned above, OPP is not an amino acid analog; thus, OPP can be added directly to cells in complete media (i.e., methionine-containing) or used to detect in vivo protein synthesis. It also can be used with cell lines that are sensitive to media exchanges or incubation in methionine-free media. The combination of high cell permeability and signal-to-noise ratio makes OPP an ideal candidate compound to study nascent proteomes across a wide array of cellular types and conditions. The kit contains all of the components needed to detect incorporated OPP with orange-fluorescent AZDye 555 Azide Plus (Alexa Fluor® 555 equivalent), and blue-fluorescent Hoechst 33342 dye for nuclear staining. A sufficient amount of reagents is provided for imaging 25 coverslips or 250 wells using 96-well plates.

4°C.

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