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贝博® BBproExtra® 膜蛋白/胞质蛋白/核蛋白提取试剂盒适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织中分步提取膜蛋白/胞浆蛋白/核蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
保存温度2-8℃ 有效期一年检测方法WB,IP,co-IP,ELISA,EMSA等适用样本动物细胞/组织产品特点1.使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。2.将蛋白提取的时间缩短至1小时。
3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。产品应用WB,IP,co-IP,ELISA,EMSA等仪器准备1.离心机
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒试剂准备1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒耗材准备1.离心管
2.吸头
3.一次性手套 使用方法1. 提取液制备：
每400ul冷的蛋白提取液A/B/D中都分别加入2ul蛋白酶抑制剂混合物和2ul磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取5-10×106个细胞，在4℃，800×g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每5×106个细胞中加入400ul冷的蛋白提取液A，混匀后，在4℃条件下用试剂盒所配针筒反复吸吹细胞，使细胞完全破裂。
5. 在4℃，1000×g条件下离心5分钟。
6. 将上清（I）吸入另一干净离心管，在沉淀中加入100-200μl冷的提取液B，高速涡旋振荡15秒，充分混匀。
7. 将混匀的提取液B置4℃低速振荡30-40分钟。
8. 在4℃，12000×g条件下离心10分钟。将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
9. 在步骤6中所得到的上清（I）中加入8ul提取液C，充分混匀。
10. 在2-8℃振荡20-30分钟。
11. 在37℃水浴10分钟。
12. 在37℃下 1000×g离心3分钟，此时溶液分为两层，上层是胞浆蛋白部分，下层部分（II）是膜蛋白约为40-50μl。
13. 将上层小心吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白。
14. 用80-150μl冰冷的提取液D溶解步骤12中的下层部分（II），即得膜蛋白。
15. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
