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产品内容：
| 产品组成 | GWP101S | GWP101M | GWP101L |
| 500 U | 1000 U | 2500 U | |
| WizsmartTM Taq DNA Polymerase | 100 μL | 200 μL | 500 μL |
| 10X Taq PCR Buffer | 2 mL | 3 mL | 8 mL |
浓度：5 U/μL
保质期：36个月
保存条件：-20℃
产品简介：
WizsmartTM Taq DNA Polymerase是通过将编码Thermus aquaticus DNA polymerase基因的质粒转化到大肠杆菌，经诱导表达后分离纯化获得，其分子量约为94KD。该酶有5′-3′DNA聚合酶活性和5′-3′外切酶活性，但无3′-5′外切酶活性。经检测无外源核酸酶的污染和宿主DNA的残留，扩增效率高，稳定性好，适合用于常规的PCR扩增和菌落PCR。
主要应用
- PCR快速扩增
- 菌落PCR
- 扩增的DNA片段可用于TA克隆
- 延伸速度：2-6kb/min
- 简单模板，如以λDNA为模板，30秒的延伸时间可以有效扩增3kb片段，4分钟的延伸时间可以有效扩增不超过8kb片段
- 复杂模板，如以人基因组为模板，可以有效扩增不超过3kb片段。
- 扩增产物3’端突出一个“A”碱基，可直接用于T载体克隆
75℃、30min内催化15 nmol脱氧核糖核酸生成非酸解物质的酶量定义为一个活性单位，即1 U。
使用指导：
- 推荐反应体系：
| 成分 | 常规PCR | 菌落PCR | |
| 10× Taq Buffer | 3 μL | 5 μL | 3 μL |
| dNTP (10mM each) | 0.3 μL | 0.5 μL | 0.3 μL |
| Forward primer✲（20 μM） | 0.3 μL | 0.5 μL | 0.3 μL |
| Reverse primer✲（20 μM） | 0.3 μL | 0.5 μL | 0.3 μL |
| 模板DNA✲✲ | X μL | X μL | 0.5-3 μL |
| WizsmartTM Taq DNA Polymerase | 0.3 μL | 0.5 μL | 0.3 μL |
| 灭菌ddH2O | 补水至30μL | 补水至50μL | 补水至30μL |
✲：推荐的引物终浓度为0.2μM，但可以根据需要在0.1-0.5μM范围内变化。
✲✲：常规PCR模板为质粒、基因组等；菌落PCR模板为菌液，通常加入3μL菌液作为模板，例如可以将单克隆于96孔深孔板（200μL LB/孔）在37℃摇床振荡培养1-3h后吸取3μL菌液即可作为模板，如果是过夜培养的菌液，通常0.5μL即能满足菌落PCR需求，过多菌液可能会导致PCR产物电泳挂孔，甚至导致PCR失败。
- 将反应管上下颠倒混匀数次，尽量避免产生气泡，最后使用微型离心机离心后置于PCR仪进行扩增反应；
- PCR反应程序：
| 步骤 | 温度 (℃) | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95 | 4 min | 1 |
| 变性 | 94 | 30 s | 25-35✲✲ |
| 退火 | X✲ | 30 s | |
| 延伸 | 72 | Y✲✲✲ | |
| 终延伸 | 72 | 5-10 min | 1 |
| 保存 | 4 | ＋∞ | 1 |
✲：建议以一对引物中Tm较低的引物Tm-5℃作为退火温度；
✲✲：菌落PCR通常25个循环即可，对于模板量较低的PCR扩增，循环数可以增加到
35个循环。
✲✲✲：延伸时间Y可以参考下表确定：
| 扩增子长度 (kb) | 扩增速度 (kb/min) |
| 0-3 | 3 |
| 3-8 | 2 |
- 无扩增产物或扩增效率低
- 重复一次，排除操作误差
- 检查引物是否因储存不当降解
- 模板是否储存时间太长或是反复冻融导致降解；
- 模板GC含量是否过高，过高可在反应体系中添加DMSO或甜菜碱等变性剂；
- 延长延伸时间
- 增加扩增循环数
- 优化退火温度
- 如果PCR体系模板量较低（譬如30μL反应体系模板量为1amol质粒），降低酶的使用量可能提高扩增产物的量，可以尝试将酶的加入量降低至标准量的1/4-1/2；
- 出现非特异性扩增或smear带：
- 引物特异性差，引物与模板有非特异性结合，必要时重新设计引物
- 模板被污染或降解：重新制备模板
- 减少酶用量
- 缩短延伸时间
- 减少循环数
- 降低引物浓度
