尿液外泌体提取试剂

【产品名称】

尿液外泌体提取试剂

【包装规格】

规格：10人份/盒

【预期用途】

用于人尿液样本中外泌体提取、富集、纯化等步骤。其处理后的样本仅用于体外检测，不用于疾病治疗。

【检测原理】

Exosome（外泌体）是由活细胞分泌的直径约为30-150nm的小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构；存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中；Exosome携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息，不仅在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用，更有望成为多种疾病的早期诊断标志物^[1]。

本试剂盒采用独特的分离技术，可以快速从尿液中获得大量完整的外泌体颗粒。外泌体产物适用于下游的电镜分析、Western Blot、NTA分析和 NanoFCM 分析等应用，获得的外泌体类物质可直接用于靶标蛋白的检测。

【试剂盒主要组成】  

【储存条件及有效期】

产品在2℃～8℃保存，从生产之日起有效期12个月。

【适用仪器】

本试剂盒适用于人工手工操作或与具备自动加样功能的外泌体提取设备配套使用。

【检验方法】

操作步骤：

1）将尿液样本（新鲜样本或者冻存后融化的样本）于 25 ~ 37℃水浴解冻至完全成为液态，并置于2-8℃备用。

2）4℃，3000g 离心 10min去除尿液样品中的细胞及碎片。（多次离心，直至样本澄清）

3）取5ml离心后的上清转移至新的洁净 EP 管中。

4）向上述收集的尿液样品中加入1.8ml的提取剂。

5）涡旋混匀尿液样品外泌体提取试剂混合物，直至成为均质溶液。2-8℃孵育60 min。

6）孵育结束后，4℃，10000g 离心 30 min。

7）吸弃上清液，EP 管底部的米色或白色沉淀物即含有外泌体（大部分情况下肉眼不可见）；用移液枪小心吸弃残留液体。

8）加入150ul 缓冲液,涡旋30S,重悬沉淀物。

9）将含有重悬液的离心管转移至1.5ml离心管中，于 4℃，12,000×g 离心 5 min，弃沉淀，保留上清液，该上清液即富含外泌体颗粒的溶液。

10）所获得的总外泌体即可用于下游分析鉴定实验，或进一步纯化总外泌体。

裂解后得到的蛋白或多肽溶液可直接用于下游应用，并可将其于4℃保存24小时，-80℃长期保存。建议将蛋白或多肽溶液进行分装后保存，避免将其反复冻融。

【检测方法的局限性】

◆不合理的样本采集、转运、储存均有可能导致蛋白或多肽提取失败。

◆对于说明书中未提及的样本类型，需要客户自行验证该提取试剂的性能。

【产品性能指标】

符合产品技术要求规定

【注意事项】

◆试剂应在有效期内使用。

◆操作前应仔细阅读使用说明书，严格按照说明书的操作步骤进行。

◆为防止样本蒸发及避免污染，孵育时应盖住管口。 

◆实验中应避免直接接触待检样本，以防可能的疾病感染。

◆样本应视为存在潜在的生物危害，实验结束后作为潜在传染源处理。

◆本试剂盒仅用于体外诊断。