SUMO Protease

碧云天生产的SUMO Protease (Small Ubiquitin-related Modifier Protease)，是一种重组表达的高度特异性识别SUMO化修饰或SUMO结构域，并水解SUMO羧基端(C端) x-Gly-Gly-x肽段中Gly-Gly后的肽键，从而去除SUMO化修饰或者去除SUMO融合表达蛋白中SUMO结构域的蛋白酶。本产品是一种来自Saccharomyces cerevisiae的高活性的半胱氨酸蛋白酶(cysteinyl protease) Ulp1 (Ubl-specific protease 1, ubiquitin-like protein-specific protease 1)基因片段的重组表达蛋白。

SUMO是一种泛素样蛋白(Ubiquitin-like Protein)，是一种非常常见蛋白翻译后修饰(post-translation modification, PTM)，对于蛋白的稳定性、生物学功能有重要的调节作用。

SUMO也常被作为一种非常高效和有用的标签用于蛋白的表达纯化，例如碧云天的D2918 pET-N-His-PreScission-SUMO质粒就是一种在N端同时表达His标签和SUMO标签的原核表达质粒。将SUMO作为标签和目的蛋白的氨基端(N端)进行融合表达时可以改善目的蛋白的折叠，提高目的蛋白的可溶性和产量。随后使用SUMO Protease对SUMO融合蛋白进行酶切,去除SUMO标签就可以获得完全没有标签蛋白干扰的目的蛋白。因此SUMO Protease可以高效且特异性地用于从重组融合蛋白上完全切割去除SUMO标签，从而最大限度地减少了对目的蛋白结构和功能的影响。

SUMO Protease进行酶切时的最适pH值为8.0，最佳酶切温度为30℃。但SUMO Protease在较宽的pH范围(6.0-10.0)在较宽的温度范围(2~30℃)，较宽的离子强度范围(0-400mM NaCl)内均具有较高的酶活性。在实际操作过程中，为尽量保持目的蛋白的结构和生物活性，建议在4℃用SUMO Protease酶切过夜。SUMO Protease在还原剂DTT(0.5~2mM)存在的情况下酶切活性更高，酶切体系中加入适当浓度DTT可以显着提高酶切效率，尤其是在长时间的酶切过程中，例如4ºC酶切过夜。

推荐使用带有His/SUMO双标签的碧云天研发生产的原核表达质粒pET-N-His-PreScission-SUMO (D2918)用于融合蛋白的构建，在使用镍柱纯化介质(BeyoGold™ His-tag Purification Resin(耐还原螯合型) (P2210/P2218/P2220)和BeyoGold™ His-tag Purification Resin(耐变性剂型) (P2233))纯化带有His/SUMO双标签的融合蛋白后，使用SUMO Protease可以将His和SUMO标签同时切除，而目的蛋白的N端可以不残留任何额外的氨基酸残基。碧云天生产的SUMO Protease因为带有His标签，也可以和融合蛋白的His-SUMO标签一起通过与镍柱结合而非常方便地一起去除。

活性定义：One unit of SUMO Protease cleaves ≥85% of 2μg control substrate in 1 h at 30 ℃。

碧云天生产的SUMO Protease酶活性鉴定结果可参考图1。

图1. 碧云天SUMO Protease酶切带有SUMO标签的目的蛋白的效果图。每个样品纯化的SUMO融合蛋白2µg，SUMO Protease的用量从左至右依次为0、0.125、0.25、0.5、1和2U，30℃酶切反应1h后取样进行SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色。图A使用的酶切缓冲液为1X SUMO Protease Buffer + Salt，图B使用的酶切缓冲液为1X SUMO Protease Buffer - Salt。

来源：碧云天生产的SUMO Protease通过大肠杆菌重组、表达和纯化而获得，纯度≥95%。

酶储存溶液：25mM Tris-HCl (pH 8.0), 250mM NaCl, 0.1% Igepal, 0.5mM DTT, 50% (v/v) glycerol。

10X SUMO Protease Buffer - Salt：500mM Tris-acetate, 2% Igepal, 10mM DTT, pH 8.0 at 25℃。

10X SUMO Protease Buffer + Salt：500mM Tris-acetate, 1.5M NaCl, 2% Igepal, 10mM DTT, pH 8.0 at 25℃。

本产品200U、1000U和5000U包装，分别可用于约0.4mg、2mg和10mg带有SUMO标签的融合蛋白的酶切。

-20℃保存，至少一年有效。可将SUMO Protease适当分装后在-80℃长期保存，但须注意避免反复冻融。