Cloning 无缝克隆试剂盒

Catalog NO.SCNP-10/50
产品规格： 10次反应、50次反应
试剂保存：-20℃保存，不宜反复冻融


产品简介：
无缝克隆试剂盒提供了一种新颖、高效、快速的基因克隆方法，只需DNA插入片段末端与载体末端具有15 - 20个同源碱基序列，就可以在载体的任意位点完成一个或多个目标DNA片段的克隆重组，而不需要任何限制性内切酶和连接酶。

产品特色：

1.灵活的克隆位点：任何载体的任意位置。
2.快速简便：30分钟完成载体构建。
3.精确：不会增加任何额外的程序。
4.效率高：高达90%阳性克隆率。


适用范围：




操作流程：

1.采用酶切或PCR扩增方法将载体线性化。
2.使用设计好的引物进行目的DNA片段的PCR扩增。
3.将目的DNA片段和线性化载体以摩尔比2:1加到试管中进行重组反应：



4.混匀后在42℃孵育30分种，然后转移到冰上。
5.使用5 μl反应液转化到感应态细菌中。


PCR引物设计：

1.引物的质量对重组反应的成功率有很大影响，因此强烈建议使用HPLC或PAGE纯化的引物。
2.引物设计时应该在遵循常规引物设计原则的基础上，把15-20个同源碱基序列导入引物。 根据线性化载体末端的不同类型进行如下引物设计：