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一、产品描述
善本生物ScibenECL Pico超敏化学发光液是一款超灵敏ECL化学发光辣根过氧化物酶（HRP）偶联物的免疫印迹分析实验提供明亮信号的试剂盒，可为用户在免疫印迹分析过程中实现低皮克级的蛋白检测。其灵敏度和使用方法与Thermo Scientific化学发光底物（SuperSignal™ West Pico Maximum Sensitivity Substrate，货号34077、34079、34080）一样。ScibenECL Pico超敏化学发光液能够兼容各种膜、封闭液和宽范围抗体稀释液，以出色性能、通用性和高性价比，满足用户的免疫印迹应用需求。
ScibenECL Pico超敏化学发光液特点：
- ECL：用于HRP的超灵敏化学发光底物；
- 低皮克级灵敏度：检测硝化纤维素膜或PVDF膜上低皮克级（Low-picogram，10-12）的蛋白条带；
- 长信号持续时间：在条件优化情况下，经底物孵育的印迹条带能够持续6～8小时的可检测光信号；
- 稳定试剂：工作液室温下24小时有很好的稳定性；试剂盒在4℃密封避光下可稳定放置长达1年；
- 价格更经济：相比其他品牌的类似产品，不仅具有高品质和高性能，同时价格也更低；
- 0.1～0.5 µg/ml一抗（以1 mg/ml储存液稀释1:2000～1:10000倍）；
- 10～50 ng/ml二抗（以1 mg/ml储存液稀释1:20000～1:100000倍）。
用于HRP标记抗体的Western Blot和HRP标记探针的核酸杂交。
三、使用方法
1、执行常规SDS-PAGE、转膜和Western Blot步骤。注意用HRP标记lgG或用一抗-链亲和素-生物素-HRP夹法。
操作概述
注：优化抗原和抗体的浓度。必须使用建议的抗体稀释度，以保证阳性结果。
1）将一抗浓度稀释到0.1～0.5 mg/ml；
2）将二抗浓度稀释到10～50 ng/ml；
3）将A液和B液两种组份按1:1比例混合，制备发光工作液；
（注：暴露于日光或任何其他强光可能损害工作液，为获得最佳结果，将此工作液保存在琥珀色瓶中，并避免长期暴露于任何强光。短时间暴露于实验室常规照明不会损害该工作液）
4）将印迹膜在该ECL发光工作液中孵育3～5分钟；
5）移去多余试剂，并用清洁的塑料膜盖住该印迹膜；
6）使印迹膜在X光胶片上曝光。
2、Western Blot最后一次洗膜的同时新鲜配制发光工作液：分别取等体积的溶液A和B，放入干净容器中混合。建议立即使用工作液，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。
3、用镊子取出膜，搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥。将膜完全浸入发光工作液（0.01～0.1 ml发光工作液/cm2膜）中，与发光工作液充分接触。室温孵育3～5分钟，准备立即压片曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度，有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应，使用过少的发光工作液不利反应进行，也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。为达节约目的可将膜剪小但勿降低发光液用量。
4、用镊子夹起膜，搭在滤纸上沥干发光工作液。但勿洗去发光液。
5、打开X光胶片暗盒，在暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将Western Blot膜贴在保鲜膜上，将保鲜膜折起来完全包裹Western Blot膜，去除气泡和皱褶，可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖Western Blot膜的保鲜膜固定在暗盒内，蛋白带面向上。
6、暗房内压X光胶片，分别曝光不同的时间如数秒到数分钟。显影冲洗。
四、储存方法
4 ℃密封避光保存1年以上。短期可放置室温。
五、安全性
无特殊毒性，按普通化学品处理。
六、注意事项
1、步骤1～5可在日光灯下操作；但发光液暴露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。
2、长时间曝光或蛋白过量，将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。
3、发光工作液孵育约3分钟后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见，低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使X光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使X光胶片感光，因而弱带可曝光1～8小时。如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL发光和曝光。
4、由于超敏发光液极其灵敏，强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗1:2000～1:10000，二抗1:20000～1:50000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带，导致失败。
5、某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光，应选择高质量保鲜膜。
6、使用肉眼可见的预染色蛋白Marker和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。
7、叠氮钠（NaN3）能抑制HRP活性，回收第二抗体应避免使用NaN3，如必需使用勿超过0.01%。
