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- 细胞名称：NCI-H2170细胞（人肺鳞癌细胞）
- 形态：上皮型，贴壁生长
- 含量：>1x106 个/瓶
- 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
- 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装
二、细胞接收后的处理：
1、贴壁细胞
- 收到T25方瓶细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们（冻存管细胞收到后直接37℃水浴复苏或直接放置于液氮中长期储存）。
- 请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
- 弃去T25瓶中的培养基，换用新鲜的完全培养基。
- 如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代。
- 接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。
2、悬浮细胞
- 收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
- 请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将15ml离心管置于37℃培养约2-3h。
- 1200rpm离心5min，弃去15ml离心管中的培养基，细胞沉淀用新鲜的完全培养基重悬并培养。
- 如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代。
- 接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。
本公司的细胞培养操作规程，供参考
一、培养基及培养冻存条件准备：
- 准备RPMI-1640培养基，90%；优质胎牛血清，10%。
- 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
- 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
- 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
- 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化2-3分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。
- 轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1200RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加入1mL培养液后吹匀。
- 移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，先要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的1-3步骤进行，最后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后离心，用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
注意事项：
1. 收到冻存管细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
3. 细胞用途：仅供科研使用。
发货方式：
复苏后发货：我们复苏细胞后发货，货期一周左右，免运费。（气温较好建议复苏后发货）
冻存发货(干冰运输）：需额外增加干冰运费，选择干冰运输的我们发两管细胞，为了保证客户接种可靠性多发一管。（气温低于0℃须冻存发货）
细胞发货采取专业的运输包装，并选择最快捷的运输方式（顺丰速运或其他空运快递）
环状RNA CircHIPK3通过miR-379调控IGF1表达促进非小细胞肺癌细胞系NCI-H1299与NCI-H2170的细胞增殖
背景与目的 已有的研究证明:环状RNA是一类在哺乳动物中普遍存在的具有稳定闭合环状结构的内源性RNA分子.环状RNA circHIPK3(circular RNA HIPK3,circHIPK3)在肝细胞癌(hepatocellular carcino-ma,HCC)中表达水平较高,促进肝癌细胞生长.但是其在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的作用及其调控机制尚无文献报道.本研究拟探讨环状RNA circHIPK3对NSCLC细胞系NCI-H1299和NCI-H2170细胞增殖的影响,并进一步研究其调控的分子机制.方法 Real-time PCR法检测circHIPK3在NSCLC各细胞系中的表达水平.CCK-8实验和克隆形成实验检测过量表达和干扰circHIPK3对细胞增殖的影响.双荧光素酶报告基因实验分别检验miR-379与circHIPK3及miR-379与IGF1 mRNA的结合情况.Western blot和ELISA检测细胞内外的IGF1蛋白表达水平.结果 环状RNA circHIPK3在6株NSCLC细胞株中均有表达,其中H1299表达最低,H2170表达最高,通过转染过表达的circHIPK3可显著促进NCI-H1299细胞增殖,干扰circHIPK3可显著抑制NCI-H2170细胞增殖.miR-379可与circHIPK3及IGF1 mRNA直接结合.过表达circHIPK3导致IGF1表达量上调,干扰circHIPK3能够下调IGF1表达水平,转入miR-379 mimics恢复了circHIPK3稳转细胞株IGF1表达水平的上调及细胞增殖表型.结论 环状RNA circHIPK3在NSCLC细胞系NCI-H1299及NCI-H2170中可通过miR-379调控IGF1表达促进细胞增殖,环状RNA circHIPK3可能成为非小细胞肺癌治疗的新靶点.
Effects of Naringenin on the proliferation and apoptosis of lung cancer cell NCI-H2170
Objective To investigate the effects of Naringenin on the proliferation, apoptosis and cell cycle of human lung squamous cell carcinoma cell line NCI-H2170. Methods The proliferation of NCI-H2170 cells was detected by MTT assay. The morphological changes of NCI-H2170 cells were detected by Hoechst33258/PI staining. Cell cycle changes were measured by flow cytometry(FCM). Western blot was used to detect the expression of PARP, Bid, Bcl-2,procaspase-3 and procaspase-8 in NCI-H2170 cells treated with naringenin. Results The proliferation of human lung squamous cell carcinoma NCI-H2170 cells were inhibited in a dose-dependent manner after treating with Naringenin for 24 h. It was not significant difference between 12.5 μmol/L treatment group and the control group(P 0.05).However,25, 50, 100 μmol/L treatment groups were significantly different comparing to the control group(P 0.05). The results of flow cytometry analysis showed that it was not significant difference between 12.5 μmol/L treatment group and the control group(P 0.05). However, after NCI-H2170 cells were treated with 25, 50, 100 μmol/L naringenins, the number of cells had significantly increased in G_1 phase, desceased in S phase and G_2 phase, comparing to the control group(P 0.05). Naringenin up-regulated Bid expression, promoted the degradation of PARP and the decrease of Bcl-2, proaspase-3 and proaspase-8 in NCI-H2170 cells,comparing to the control group(P 0.05). Conclusion Naringenin inhibits the proliferation of human lung squamous cell carcinoma cell line NCI-H2170 and induces the G_1 pha se arrest in NCI-H2170 cells and induces cell apoptosis.
