DRNAzolTM 血清病毒DNA/RNA 提取试剂

DRNAzol^TM血清病毒DNA/RNA提取试剂盒使用说明书 本试剂盒由裂解液、蛋白沉淀液组成。可同时从血清中提取病毒DNA和RNA基因组。整个提取过程不超过45分钟。提取过程包括：1裂解血清中的病毒颗粒。2盐析沉淀蛋白，分离DNA和RNA。3异丙醇沉淀脱盐并浓缩。4 70%乙醇清洗，晾干并用DNA和RNA溶解液溶解。裂解液中含有抑制DNA酶和RNA酶的成分，在加热（65°C）状态下，可保证完整的病毒DNA和RNA的充分裂解释放，异丙醇沉淀时，罕见浑浊的蛋白质杂质的共沉淀。提取血清DNA和RNA可用于PCR扩增、内切酶消化以及膜杂交等。
一、 试剂盒组成（本试剂盒提供的组份, 至少可提取100份100ul血清样本的DNA，每种组份均有足够的富余量） 1． 复合裂解液：20ml´1瓶。 2． 蛋白沉淀液：20ml´1瓶。 3． 操作说明书一份。
二、 本试剂盒未提供，须用户自备的试剂为：DEPC处理的超纯水，DEPC处理的EP离心管及家养枪头，异丙醇，70%乙醇（国产分析纯）。
三、 血清病毒DNA和RNA提取操作准备：
1． 样本要求：用于提取的血清样本，样本在-20°C存放一周以内,避免反复冻融。4°C存放3天以内，均能纯化出高质量的DNA和RNA。-80°C条件下，样本至少可存放一年。 2． 血清需求量：根据需要，本试剂盒每200ul裂解液，可提取20-100ul血清病毒DNA和RNA。如果按照每份提取血清100ul来计算，总共可以提取100份血清，提取试剂各组份用量与血清提取量的对应关系见下面表格。
四、 提取操作：以下按照提取100ul血清病毒DNA和RNA来说明：
1． 将复合裂解液置65°C水浴加热，使结晶成分溶解，准备1.5-2ml离心管，每个离心管中分装加入200ul的裂解液。 2． 分别向每个单管中加入100ul血清样本；混璇器震荡混匀10秒，置65°C水浴中反应20分钟。 表1：提取血清病毒DNA/RNA用量与组份用量对应表：

血清	复合裂解液	蛋白沉淀液	异丙醇	70%乙醇	DNA溶解液	离心管容积
100ul	200ul	200ul	400ul	200ul	25ul	1.5-2ml

3．各管中加入200ul蛋白沉淀液。上下颠倒5-6次使两者混匀。 4． 13000-16000×g, 离心3-5分钟。 5． 将上清液（约400ul）用DEPC水处理的家养枪头，转移至新的DEPC水处理的离心管中，加入等体积异丙醇，混匀后离心，同步骤5，倾去上清。 6． 离心管中加入200ul，70%的乙醇溶液，来回倒置，清洗管壁，离心同上。 7． 移去70%乙醇，倒置离心管于干净的滤纸上，自然干燥10-15分钟，按上表量加入DEPC处理的超纯水溶解液。 8． 快速漩涡震荡1-2秒，使DNA溶解液冲刷到所有沉淀的DNA/RNA。 9． 病毒DNA/RNA可直接进行PCR等下一步操作。
四、注意事项： 提取的病毒DNA/RNA样本在70%乙醇中，存于-80ºC，可长期保存。2. 为保证RNA的完整性，所用的枪头，离心管等均需事先经过DEPC水处理，灭菌后再用。如果单独针对病毒DNA进行提取，可用TE buffer代替DEPC处理水。
五、储存条件：本试剂盒在室温条件下可保存两年。
六、附图：HCV阳性血清经过本试剂盒纯化后，两步法PCR扩增的375bp片段后电泳的比较

试剂盒纯化 Trazol纯化 阴性对照