描述
mirVana™ PARIS试剂盒适用于从一份样品中分离天然蛋白质和RNA (包括小RNA)。每个试剂盒均包含足够用于40次蛋白质和总RNA (包括小RNA) 分离或20次蛋白质分离和大、小RNA片段分离的试剂和耗材。• 从相同样品分离含小RNA的总RNA和天然蛋白质
• 样品起始量可为100 – 107个培养细胞或至多100 mg的哺乳动物组织
• 富集小RNA <200 nt,提高下游分析灵敏度
• 30分钟的简单操作流程
• 适合相关的mRNA、miRNA或siRNA和蛋白质水平分析
试剂盒的工作原理
mirVana™ PARIS试剂盒程序首先采用一种包含非离子型洗涤剂的特殊细胞裂解缓冲液进行样品均质化。由于蛋白质保持完整,因此可取一部分裂解液直接用于常规蛋白质分析应用。剩余裂解液则采用了结合有机和固相提取优势、同时避免二者劣势的操作程序进行RNA的分离。
对于核糖核酸酶水平极高的组织 (如胰腺或脾脏),推荐使用mirVana™ miRNA提取试剂盒
mirVana™ miRNA Isolation Kit, with phenol AM1560 40 preps(包括酸-苯酚:氯仿。)
miRNA 分离试剂盒(不含苯酚)
mirVana™ miRNA Isolation Kit, without phenol AM1561 40 preps
描述
Ambion® mirVana™ miRNA 分离试剂盒(不含苯酚)采用快速的方法,可以从组织和细胞中分离小 RNA,如 microRNA (miRNA)、小分子干扰 RNA (siRNA) 和核内小分子 RNA (snRNA)。它是基于玻璃纤维的快速高效方法,可提取各种大小的总 RNA (从几千碱基到 10-mer)。每个试剂盒包含足够40次纯化的试剂。苯酚必须单独购买。• 高效分离含有小RNA的总RNA
• 富集小 RNA (<200 nt),提高下游分析的灵敏度
• 简单的 30 分钟流程
• miRNA、siRNA、shRNA和snRNA分析的理想选择
• 适用于几乎所有细胞和组织类型
• 提供无苯酚
高效回收小RNA
目 前的RNA纯化依赖于有机溶剂提取,然后进行乙醇沉淀或者利用玻璃纤维滤膜或硅酸盐基质吸附核酸分子。不幸的是,前一种实验方案需要酒精沉淀,这是一种耗 时又低效的回收小RNA方法;后一种实验方案(如Ambion公司的RNAqueous ® 试剂盒、Qiagen公司的RNeasy ® 试剂盒)通常会导致大量小RNA的丢失。为解决这些问题,Ambion公司研制开发了 mirVana™ miRNA 分离试剂盒,采用有机溶剂提取技术,然后利用特制的结合与洗涤溶液进行玻璃纤维滤膜纯化。该试剂盒可以从几乎所有细胞和组织类型中有效回收RNA——从大分子mRNA和rRNA到10mers。 mirVana™ miRNA 分离试剂盒最多可从40份样本102–107 培养细胞/样本或 0.5–250 mg 组织/样本——中分离含有小RNA的总RNA。
富集小RNA
Although the mirVana™ miRNA Isolation Kit 不仅可以高效纯化大于10nt的RNA,还可以分离RNA碎片——针对小RNA中特地要富集或去除的RNA。通过 mirVana™ miRNA Isolation Kit 的富集实验方案,不超过200 nt的RNA分子能够被高效地从大分子RNA中纯化出来。由此制备的RNA高度富集了miRNA、siRNA和/或snRNA。无论进行Northern 分析还是溶液杂交分析,与利用总RNA的相同Assay相比,使用 mirVana™ miRNA Isolation Kit 的实验方案富集小RNA能够减弱背景,从而提高小RNA检测的灵敏度。