ATGScript® RT Mix for qPCR (+g

产品简介 ATGScript^® Reverse Transcriptase 是在 M-MLV (H- ) Reverse Transcriptase 基础上经过饱和定点突变得到的全新逆转录酶。经过热点突变，ATGScript^® Reverse Transcriptase 的错配率比 M-MLV (H- ) Reverse Transcriptase 大幅降低，提高了克隆的保真度和热稳定性。通过优势组合突变增强了其与模板的亲和力，特别适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。ATGScript^® RT mix for qPCR (+gDNA wiper)适用于两步法 qRT-PCR 检测，加入模板 RNA 和水即可迅速反应。产品中的 4 × gDNA wiper Mix 可彻底去除残留的基因组 DNA 污染，保证后续定量结果更加可靠；5 × ATGScript^® RT Mix 中含有逆转录反应所需的所有组分，同时终止 gDNA wiper 作用，保证 cDNA 的完整性。本产品针对 qPCR 进行特别优化，比例优化的 Random primers/Oligo dT primer mix，使 cDNA 合成可从 RNA 转录本的各个区域起始并具有相同的逆转录效率，大程度保证了qPCR 结果的真实性和可重复性。逆转录产物兼容 SYBR^® Green 和探针法 qPCR，可以根据实验目的，选择相应的试剂配合使用，进行高性能的基因表达分析。
  产品组成
 

组分	R113 ( 100 rxns ) ( 20 μl/rxn )
RNase free ddH2O	2 × 1 ml
5 × ATGScript® RT Mix	400 μl
5 × Control No RT Mix	40 μl
4 × gDNA wiper Mix	400 μl

 

 

 

 

*1. 包含 ATGScript® Reverse Transcriptase、dNTP、RNasin、Random primers/Oligo dT primer mix。 *2. 除不含 ATGScript® Reverse Transcriptase 外，其余成分与 5 × ATGScript® RT Mix 相同。
  储存条件 -20℃保存，于-20 ~ 0℃运输。▲避免反复冻融。
  质量控制 核酸外切酶残留检测： 20 U 本品和 0.6 μg λ-HindIII 在 74℃下孵育 1 h，DNA 的电泳谱带不发生变化。 核酸内切酶残留检测： 20 μl 反应体系，10 U 本品和 1 μg λDNA，37℃温育 4 h，DNA 的电泳谱带无变化。 RNase 残留检测： 20 U 本品和 1 μg Hela 细胞总 RNA 在 37℃下孵育 30 min，RNA 的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留 DNA 残留检测： 50 μl 体系中，以 ddH2O 为模板，扩增 E. coli 16 s rDNA 基因。30 个循环后进行 1%琼脂糖凝胶电泳，染色，无扩增条带。 功能检测： 以 1 μg 总 RNA 为模板，Oligo (dT)23VN 为引物，42℃反应 45 min。取 1/10 cDNA 产物进行 PCR 扩增 VIN 基因。琼脂糖凝胶电泳，EB 染色，可见有单一的 4.6 kb 条带。