ATGScript® 1st Strand cDNA Syn

产品简介 ATGScript® Reverse Transcriptase 是在 M-MLV (H- ) Reverse Transcriptase 基础上经过饱和定点突变得到的全新逆转录酶。经过热点突变，ATGScript® Reverse Transcriptase 具有更高的热稳定性，使其可用于具有二级结构或 GC 含量较高的 RNA 模板的逆转录，并可获得更多全长的 cDNA。并且 ATGScript® Reverse Transcriptase 的错配率比 M-MLV (H- ) Reverse Transcriptase 大幅降低，提高了克隆的保真度。通过优势组合突变增强了其与模板的亲和力，特别适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。 ATGScript® 第一链 cDNA 合成试剂盒基于 ATGScript® Reverse Transcriptase，包含合成高质量第一链 cDNA 所需的所有成分，适合于后续的 PCR、qPCR 以及 PCR 克隆。产品中的 4 × gDNA wiper Mix 可彻底去除残留的基因组 DNA 污染，保证后续定量结果更加可靠；5 × ATGScript® RT Mix 包含优化的缓冲体系和 dNTP；Enzyme Mix 包含 ATGScript® Reverse Transcriptase 和 RNasin。可根据需要，选择 Oligo (dT)23VN、Random hexamers 或基因特异引物作为逆转录引物。
  产品组成

组分	R112 ( 100 rxns ) ( 20 μl/rxn )
RNase-free ddH2O	2 × 1 ml
5 × ATGScript® RT Mix	400 μl
ATGScript® Enzyme Mix	200 μl
Oligo (dT)23VN (50 μM)	100 μl
Random hexamers (50 ng/μl)	100 μl
4 × gDNA wiper Mix	300 μl

 

 

 

 

 

*1. 包含 1 mM each dNTP *2. 包含 RNasin (ATG #RR101)、耐高温逆转录酶 ATGScript® Reverse Transcriptase
  储存条件 -20℃保存，于-20 ~ 0℃运输。▲避免反复冻融。

质量控制 核酸外切酶残留检测： 20 U 本品和 0.6 μg λ-HindIII 在 74℃下孵育 1 h，DNA 的电泳谱带不发生变化。 核酸内切酶残留检测： 20 μl 反应体系，10 U 本品和 1 μg λDNA，37℃温育 4 h，DNA 的电泳谱带无变化。 RNase 残留检测： 20 U 本品和 1 μg Hela 细胞总 RNA 在 37℃下孵育 30 min，RNA 的电泳谱带不发生变化。 大肠杆菌残留 DNA 残留检测： 50 μl 体系中，以 ddH2O 为模板，扩增 E. coli 16 s rDNA 基因。30 个循环后进行 1%琼脂糖凝胶电泳，染色，无扩增条带。 功能检测： 以 1 μg 总 RNA 为模板，Oligo (dT)23VN 为引物，42℃反应 45 min。取 1/10 cDNA 产物进行 PCR 扩增 VIN 基因。琼脂糖凝胶电泳，EB 染色，可见有单一的 4.6 kb 条带。