■ 灵敏:低至 1 ng 的模板也能被准确识别
■ 抗逆:无惧复杂模板,抵御杂质干扰
■ 快速:21 min 高效制备无基因组残留的 cDNA下游应用反转录后的 cDNA 可用于常规 PCR,荧光定量 PCR,cDNA 文库构建,SAGE(基因表达连续分析),引物延伸等多种常规实验。21 min 的“一管式”革命仅需 21 min 在同一管内完成基因组去除和高效反转录过程,无需更换反应管和独立的DNase I 处理过程,相对于传统方法12 步操作所需的140 min,大大简化了操作步骤,节省了大量操作时间。

单链RNA 因链间氢键作用而存在广泛的复杂二级结构区域,普通反转录酶在遇到复杂二级结构时可能会导致反转录的终止,从而无法成功完成cDNA 的合成。而新一代King 反转录酶具有独特的结构域,可以破坏RNA 链间的氢键作用力,从而打开RNA的复杂二级结构,保证反转录的正常进行。

实验结果
3min 高效去除基因组DNA
gDNase 可高效快速的去除gDNA,并直接进行反转录实验,无需繁琐的后续RNA 纯化步骤。
1 组:不去基因组反转录;2 组:不去基因组不反转录;
3 组:去基因组后反转录;4 组:去基因组不反转录。方法:以1 μg Hela 细胞RNA(有基因组残留)为模板,对TNFalpha基因(引物设计在外显子上,可以cDNA 或基因组为模板进行扩增)进行荧光定量PCR 检测。
结果:如图所示,2 组可反映RNA 中基因组的残留情况,3 组可准确反映TNF-alpha 的真实表达水平,1 组因基因组残留而导致最终定量结果发生错误,4 组表明KR116 可以完全去除RNA 中残留的基因组DNA。

继承King 家族卓越品质
超高的反转录效率
——反转录效率高达95%
一般的反转录酶其反转录效率在40-60%,为增加cDNA 产量,其通过推荐更高的RNA 上样量来实现,King 反转录酶由于其特有的对于RNA 模板的高亲和力,使其反转录效率能够达到95% 以上,所以无需大量上样即可满足后续实验,既节省RNA,又使得cDNA 高纯高产。
实验结果显示:不同来源反转录酶的性能比较:同比无RNaseH活性M-MLV及 AMV系列反转录酶,King Reverse Transcriptase反转录效率有明显优势。
超强的复杂模板通读能力
——可轻松通读高GC 和复杂模板
单链RNA 因链间氢键作用而存在广泛的复杂二级结构区域,普通反转录酶在遇到复杂二级结构时可能会导致反转录的终止,从而无法成功完成cDNA 的合成。而新一代King 反转录酶具有独特的结构域,可以破坏RNA 链间的氢键作用力,从而打开RNA 的复杂二级结构,保证反转录的正常进行。
实验结果:
图1. 使用TIANGEN FastKing RT kit(KR116,左)及国外A 公司同类产品(右)反转录小鼠RNA,
使用TIANGEN FP205 进行定量MM5 基因,展示扩增曲线和熔解曲线。RNA 使用量分别为1000 ng,100 ng,10 ng,1 ng。结果显示,TIANGEN KR116 反转录梯度清晰,Ct 值靠前,并且对于低丰度模板(1ng,蓝色箭头)的反转录具有明显优势。
超强的复杂模板通读能力
——可轻松通读高GC 和复杂模板
单链RNA 因链间氢键作用而存在广泛的复杂二级结构区域,普通反转录酶在遇到复杂二级结构时可能会导致反转录的终止,从而无法成功完成cDNA 的合成。而新一代King 反转录酶具有独特的结构域,可以破坏RNA 链间的氢键作用力,从而打开RNA 的复杂二级结构,保证反转录的正常进行。
实验结果:
图2. 使用TIANGEN FastKing RT kit(KR116)及A 公司同类产品分别反转录大鼠的正常RNA 样本(红色),酚类残留量大的RNA 样本(绿色),和醇类残留量大的RNA 样本(蓝色),使用TIANGEN FP205 进行定量RNC 基因,展示扩增曲线和平均Ct 值。结果显示,TIANGEN KR116 反转录后定量Ct 值靠前,并且抗逆性优秀,对于高杂质残留的模板具有明显优势。