T4 DNA Ligase，DNA连接酶

产品编号：GTD-001
产品规格：35000U (350U/μl）
产品储存：-20℃
产品价格：120.00



产品简介：
该酶催化契合双链DNA或RNA的5'-磷酸末端和3'-羟基末端形成磷酸二酯键。需ATP做辅酶。不仅能够催化平滑末端或粘性末端DNA之间的连接，还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切口。
活性定义：
20μl反应体系中，在16℃下反应30min时，6μg的λDNA/HindIII的酶切产物，90%以上的DNA片段被连接所需要的酶量定义为1个活性单位。本酶1U相当于0.008 Weiss Unit。
用途：

• DNA片段和载体DNA的连接
• DNA片段和Linker或Adaptor DNA的连接

反应条件：
在1×T4 DNA Ligase Buffer中，16℃温育3-5h或者过夜。16℃，5-30min也能正常进行连接反应，但反应效率会稍微降低。
热失活：
65℃温育10min即可失活。
注意事项：
10×T4 DNA Ligase Buffer中含有ATP，不宜反复冻融。使用时冰上融化，并小量分装使用。缓冲液在溶解时出现少量沉淀如正常现象。
ATP是反应必须的辅因子。如在反应体系中补加1mM的ATP，连接反应可以在限制性内切酶缓冲液或在T4 多聚核苷酸激酶缓冲液中进行。
对于普通的转化大肠杆菌的操作，不必对连接产物进行纯化，连接产物可以直接用于转化。但用电转方法转化大肠杆菌时，通常宜先用DNA纯化试剂盒（NEP013）或酚氯仿抽提方法等纯化DNA，然后进行电转。