Transcriptor高保真cDNA合成试剂盒
sufficient for 50 reactions, sufficient for 100 reactions, sufficient for 200 reactions, suitable for RT-PCR, suitable for RT-qPCR
别名:
RT-PCR, cDNA合成
一般描述
Transcriptor高保真逆转录酶混合物，用于最长达到14 kb的RNA的高保真两步法RT-PCR。
Transcriptor高保真cDNA合成试剂盒的核心成分是Transcriptor高保真逆转录酶，该酶是一种混合物，含有经过基因重组的逆转录酶及具有校正调节功能的酶。两种酶的协同作用使其混合酶在逆转录RNA模板时可以获得比其他常用转录酶高7倍的保真度。
Transcriptor高保真逆转录酶混合物能有效逆转录长达14 kb的模板。该混合酶具有高热稳定性以及特别优化的缓冲体系，使整个逆转录过程可以在高达55°C的温度下进行。因此，无需添加任何附加成分，就可以解决具有复杂二级结构的高GC含量模板的逆转录问题，而这些附加成分可能会影响逆转录反应的准确性。
混合酶中的重组逆转录酶来自于大肠杆菌（E. coli）。该酶具有依赖于RNA的DNA聚合酶活性、依赖于DNA的DNA聚合酶活性、解旋活性及可降解RNA:DNA杂合体中RNA的RNase H酶活性。因此，在逆转录后，不再需要耗时的RNase H孵育步骤，从而缩短了反应时间并降低了实验成本。
Transcriptor高保真cDNA合成试剂盒提供了第一链cDNA合成反应过程中所需的所有试剂。该试剂盒支持三种不同引物系统的逆转录过程。该试剂盒提供了两种cDNA合成引物：随机六聚体引物和锚定oligo(dT)18 引物。其中，锚定oligo(dT)18引物可保证引物结合在poly(A) 尾的起始位置，有效避免引物结合在poly(A) 尾的中间位置，从而获得全长cDNA。长mRNA的5′ 端序列往往不完全，而锚定oligo(dT)18可保证获得全长cDNA。随机六聚体引物可结合在全长RNA上，在所有RNA序列上具有一致的性能，可用于逆转录不带有poly(A)尾结构的RNA。试剂盒还提供了具有热稳定性的保护RNA酶抑制剂（Protector RNase Inhibitor），可保护RNA在高反应温度下不被降解。
cDNA合成过程中常用的逆转录病毒逆转录酶与其他核酸分析实验技术使用的DNA聚合酶相比，往往具有更高的错误率。这会造成明显的碱基交换或移码，而这些错误会在后继PCR反应中被进一步放大。具有校正功能的高保真PCR酶已拥有很多年的历史；本次 Roche推出的全新高准确性逆转录酶能够进一步合成高产量全长cDNA。
高突变率是逆转录病毒复制的特点。该特点起源于病毒编码逆转录酶的基因组复制机制，该机制可以将病毒的基因组RNA转变为双链DNA。在这个逆转录过程中，发生复制错误的概率很高。一种目前可被接受的解释是逆转录酶缺少3'-5'外切酶活性，导致这种错误的发生。逆转录酶天然存在的高错误率使其无法在多种应用中表现出最佳性能。
应用
Transcriptor高保真cDNA合成试剂盒专为RNA逆转录设计，比其他逆转录酶具有更高的保证度。该试剂盒采用Transcriptor高保真逆转录酶，该酶是由一种重组逆转录酶和一种具体校正调节功能的酶组成的混合物，通过针对两步RT-PCR法进行优化，使其成为以下应用的产品：
- 克隆目的基因。
- 转录组测序
- 生成含有大分子全长插入片段的cDNA文库
- 生成基因表达分析，如RNA剪接分析
特点和优势
提高逆转录反应的准确性。
- 优化的混合酶提供比其他常用逆转录酶高7倍的保真度。
- 借助Genome Sequencer 20系统对几百万个碱基序列进行测定，提供真实可靠的保真数据。
