Gel-Green Plus (EB升级换代产品, 1000

碧云天的Gel-Green Plus (增强版凝胶绿)核酸染料是一种Gel-Green、EB (Ethidium bromide，溴化乙锭)的升级换代产品，用于凝胶中DNA、RNA等核酸的染色。Gel-Green具有安全(未检测到致突变性和细胞毒性)、灵敏度高、稳定性好等优点，凝胶中的核酸在使用本产品后经约500nm波长蓝光(也可以使用约260nm紫外光，但紫外成像条带相对较暗)激发呈现绿色荧光，适用于原先使用SYBR Green或SYBR Gold为核酸染料的凝胶成像和检测系统。Gel-Green Plus是Gel-Green的增强版，相对于Gel-Green，使用方法完全一致，但条带更清晰、更均匀、背景更低，大大降低条带的拖尾和弯曲，而且对条带迁移几乎没有影响，即使上样量很高，也可获得良好的条带分离效果。

由于Gel-Green Plus在500nm左右处有最大的激发波长，可以使用对人体无害的蓝光灯或蓝光成像仪进行核酸检测，从而避免常规的紫外检测对核酸样品的致突变性，以及紫外对人的眼睛和皮肤的伤害。特别在切胶回收时，使用Gel-Green Plus并用蓝光灯具有很大的优势，不仅可以避免核酸样品的突变，也可以避免紫外光对人体的伤害。

Gel-Green Plus比EB或SYBR Green更安全。Gel-Green Plus在远高于其工作浓度范围时均没有细胞毒性及诱变性。微型艾姆斯氏试验(Mini-Ames test)结果表明，即使在S9代谢活化时，也没有检测到致突变性。Gel-Green Plus、Gel-Green和碧云天另外一种安全型核酸染料Gel-Red，由于它们特殊的化学结构使其难以进入细胞，从而大大降低甚至避免了染料的致突变性和细胞毒性。而SYBR Green染料可以穿透细胞膜，进入活细胞并染色DNA。并且有报道SYBR Green可以强烈增强紫外线诱导的基因突变。

Gel-Green Plus检测灵敏度高，对于小分子量核酸的染色效果好。Gel-Green Plus最低可检测1ng的DNA样品，在检测低浓度、微量DNA或RNA方面比EB更佳，尤其对小分子量的DNA检测非常灵敏。在使用浸泡染色法时，Gel-Green Plus和SYBR Gold的灵敏度相近甚至更高；与SYBR Gold不同的是，Gel-Green Plus预先配制在凝胶中也有很高的灵敏度。EB对于小分子量核酸染色效果差，而Gel-Green Plus对于小分子量核酸的染色效果很好，便于观察酶切或PCR获得的小分子量核酸片段。本说明书推荐使用的Gel-Green Plus浓度，其检测效果略优于EB。如果希望获得更高的染色灵敏度，可以适当提高Gel-Green Plus的工作浓度。

Gel-Green Plus的稳定性好，染色重复性高。含SYBR Green的凝胶核酸染色的重复性比较差，这通常是由于SYBR系列染料的稳定性差导致的。而Gel-Green Plus的稳定性很好，可以室温长时间保存及使用微波炉加热。Gel-Green Plus的光稳定性良好，可以在室内正常光线下操作而无需避光。由于其热稳定性和光稳定性，含Gel-Green Plus的凝胶在核酸染色时的重复性非常好。

Gel-Green Plus可以使用和Gel-Green、SYBR Green或EB相同的检测体系。Gel-Green Plus具有和Gel-Green、SYBR Green或SYBR Gold几乎相同的光学性质，激发光和发射光都非常接近，这样可以直接用Gel-Green Plus替换Gel-Green或SYBR Green，以使用Gel-Green或SYBR Green的凝胶观察、拍照或成像系统(约500nm激发)。对于原来用于EB染料观察的系统，可以考虑选用碧云天的Gel-Red染料来替代EB，但也可以使用没有致突变性的Gel-Green Plus来替代EB。使用Gel-Green Plus来替代EB，并且用EB的紫外检测体系时，检测灵敏度会比使用Gel-Red低约4-5倍。对于既可以观察EB也可以观察Gel-Green或SYBR Green的具有紫外和蓝光两种激发光的凝胶成像系统，则推荐直接用Gel-Green Plus来替换EB。Gel-Green Plus的激发光谱和发射光谱请参考图1。

图1.Gel-Green Plus的激发光谱和发射光谱

Gel-Green Plus的使用方法和Gel-Green、EB一致。Gel-Green Plus可以按适当比例直接加入琼脂糖中配制成凝胶，也可以在电泳完毕后对凝胶进行染色。前者更加方便，而后者灵敏度要更加高一些。但由于Gel-Green Plus本身已经非常灵敏，通常采用把Gel-Green Plus直接配制在凝胶中就可以了。对于一些特殊的情况，如核酸样品量特别少的情况等，则可以考虑电泳后再对凝胶进行染色。

Gel-Green Plus对条带迁移几乎没有影响。使用Gel-Green Plus时，样品的上样量不影响条带美观，即使上样量很高，也可获得良好的条带分离效果。

Gel-Green Plus可大大降低条带的拖尾和弯曲，条带更清晰、更均匀、背景更低。Gel-Green存在一定程度的条带拖尾、弯曲、背景高等现象，Gel-Green Plus基本解决了这些问题，而且分子量大的条带也可得到完美的分离效果。

通过凝胶回收试剂盒(如碧云天或Qiagen的凝胶回收试剂盒)或酚氯仿抽提，可以有效去除与DNA或RNA结合的Gel-Green Plus，从而确保不会影响后续的连接、酶切、PCR、测序等常规的分子生物学用途。

室温保存，至少两年有效。