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rTEV protease 产品说明书
产品编号 | 产品名称 | 规格 |
FrdE00014 | rTEV protease | 500U/1000U/10KU |
保存条件：-20℃，一年有效。
1.产品简介：
重组型TEV蛋白酶（rTEV）是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶，不仅保持天然TEV酶的功能活性，且在广谱的温度范围内表现出更强的稳定性和特异性。rTEV是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶，具有很强的位点特异性，严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间。普遍应用的七氨基酸序列为：Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。rTEV在pH 7.0，30℃时可达到最佳活性，但在pH 6.0-8.5和温度4-30℃的广泛范围内皆有活性（见表1），使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而灵活变动。另外rTEV切割后也能利用其N端的6×His标签，通过Ni-NTA树脂去除，以达到纯化目的蛋白的目的。
2.产品来源：
大肠杆菌表达
3.纯度：
经SDS-PAGE及HPLC分析，纯度> 95%
4.缓冲液组分：
50 mM Tris，pH 8.0，0.5 mM EDTA，1 mM DTT
5.比活性：
5U/ul
6.酶活定义：
在1×rTEV Buffer（50 mM Tris，pH 8.0，0.5 mM EDTA，1 mM DTT）中，30℃反应1 h，剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。
7.使用方法：
1）.取适量rTEV Buffer 2（1000×）作10倍稀释至rTEV Buffer 2（100×）。
2）.在EP管中配制如下反应体系。
| 组分 | 用量 |
| 融合蛋白 | 20 μg |
| rTEV Protease (5 U/μL) | 2-4 μL |
| rTEV buffer 1（20×） | 7.5 μL |
| rTEV Buffer 2（100×）a | 1.5 μL |
| DDW（超纯水） | up to 150 μL |
3）.30℃孵育，在1、2、4、6小时分别吸出30 μL上述反应液，置于单独的EP管中。
4）.向上述EP管中加入30 μL 2×SDS Loading Buffer，置于-20℃。
5）.样品全部反应完毕后，样品煮沸5 min，取40 μL进行SDS-PAGE分析。确定最佳反应时间。如融合蛋白要求低温处理，可将反应液置于4℃，延长反应时间，并增加rTEV酶用量，以保证酶切效果。
注意事项
1）.影响天然TEV酶活性的常见因素：1）PMSF和AEBSF（1 mM），TLCK（1 mM），Bestatin（1 mg/mL），EDTA（1 mM），Pestatin A（1 mM）以及E-64（3 mg/mL），而rTEV可兼容上述抑制剂；2）Zn离子浓度（>5 mM），同样对rTEV活性有抑制；3）与半胱氨酸反应的试剂，也是rTEV的潜在抑制剂。
2）.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
*本试剂仅供实验室研究使用
