产品描述：M-MLV Reverse Transcriptase (RNaseH-)来源于重组E.coli 菌株的逆转录酶，以RNA或RNA：DNA嵌合体为模板合成互补DNA链。采用的是无RNase H活性的M-MLV逆转录酶，避免了第一链cDNA合成过程中RNA/DNA杂交体中RNA被降解。

产品组成：

M-MLV Reverse Transcriptase (RNaseH-)

5×M-MLV Reaction Buffer

质量控制：

使用SDS聚丙烯酰胺胶分析纯度，无核酸内切酶、外切酶污染，能够对0.01-5μg总RNA或1 pg-0.5μg mRNA进行第一链cDNA合成。

PCR反应:

反转录得到的产物可直接用于PCR和qPCR反应。作为模板的cDNA产物的体积不超过PCR体积的1/10（若cDNA产物浓度过高可梯度稀释后再进行PCR）。通常50μL的PCR反应体系加入2μL第一链cDNA产物。

建议根据不同的实验目的选择合适的PCR酶和体系。

常见问题解析：

1、没有RT-PCR产物或产量低

◆ RNA模板降解。RNA的纯度和完整对于反转录得到全长cDNA是非常重要的。提取的RNA应进行电泳检测以确定其是否降解。同时RNA要避免反复冻融。

◆ RNA模板纯度低。提取RNA的过程中，可能残留一些盐离子、试剂，如EDTA、酚、胍盐、磷酸盐、多胺等抑制接下来的反转录反应。建议用75%乙醇（DEPC水配制）仔细清洗RNA沉淀。

◆ 引物不合适。选择合适的引物，当RNA是细菌RNA或者是没有poly A尾的RNA要选择随机引物或者特异引物。

◆ 目的基因含有复杂二级结构或高GC含量。建议选择随机引物进行反转录。将反转录温度提高至55℃。

2、RT-PCR产物比预期长

◆RNA中很可能污染了DNA。真核生物基因组DNA中含有内含子，可能参与了PCR扩增，可以在反转录之前对RNA进行DNase I的消化。

3、阴性对照中有RT-PCR产物

◆阴性对照中有RT-PCR产物也表明有DNA的污染。在反转录之前对RNA进行DNase I的消化。

Medicine Platform