TRzol LS Reagent

供应商：

上海聚顶生物科技有限公司

产品信息：

Brand：KEL BiotechCat No：KC1709-02Product Name：TRzol LS Reagen（t 液体样本 RNA 抽提试剂）Size：100mlStorage： RT 

产品描述：

        TRzol LS 试剂是直接从细胞或组织中提取总 RNA 的试剂。它在破碎和溶解细胞时能保持RNA 的完整性。加入氯仿替代物/氯仿后离心，样品分成水样层、中间层和有机层。RNA 存在于水样层中。收集上面的的水样层后，RNA 可以通过异丙醇沉淀来回收。       无论是人、动物、植物还是细菌，该方法对少量及大量的组织和细胞均有较好的分离效果。TRzol LS 试剂操作上的简单性允许同时处理多个样品。所有的操作可以在一小时内完成。TRzol 抽提的总 RNA 能够避免 DNA 和蛋白的污染，可用于 RNA 印迹分析、斑点杂交、poly(A)+筛选、体外翻译、RNA 酶保护分析和分子克隆。如果是用于 PCR ，当两条引物位于单一外显子内时，建议用扩增级的 DNase I 来处理抽提的总 RNA。

保存温度以及稳定性：

       TRzol LS 在室温下能稳定保存 12 个月。尽管如此，为达到最佳效果，我们建议保存在

2-8℃的环境下。氯仿替代物室温避光保存。 重要提示：       有毒物接触皮肤或者不慎吞服，会导致灼伤。一旦接触皮肤后立即以大量的洗涤剂和清水清洗。若感不适，看医生并寻求苯酚和其他成分的正确治疗方案。 注意事项：       1.从少量的组织(1~ 10mg)或细胞(102-104 个)中分离 RNA 样品：往组织或细胞中加入800µl TRzol。待样品裂解后，加入氯仿替代物并进行步骤 2 中的抽提操作。可在用异丙醇沉淀 RNA 之前，加入 5~ 10μg 无 RNA 酶的 glycogen 作为水样层的载体。为降低其黏度在加入氯仿替代物前用 26 号注射器抽吸两次以切断基因组 DNA。Glycogen 会留在水样层中并和 RNA 共析出。在浓缩到 4mg/ml 之前它不会抑制逆转录反应第一链的合成也不会抑制 PCR。       2.在匀浆化后和加入氯仿替代物之前，样品可以在-60℃或者-70℃保存至少一个月。将RNA 沉淀溶于 75%的乙醇在 2-8℃至少可以保存一周，在-5~-20℃下至少可保存一年。      3.用 TRzol LS 抽提 RNA 时要戴手套和护眼罩。避免接触皮肤和衣服。在化学通风橱完成操作。避免呼吸道吸入。如无例外，室温保持在 15~30℃的条件下。 自备试剂： 异丙醇、75%乙醇(RNase-Free water 配制)、RNase-Free water（将水加入无 RNA 酶的玻璃瓶中，加入 DEPC 至 0.1% (V/V)。放置过夜并高压灭菌）。 实验步骤：1.样品预处理a.生物液体每 0.25ml 液体样品(血清，血浆，脑脊液等等)加入 0.75ml TRzol LS，用加枪吹打液体样品几次以帮助裂解样品中细胞。每 5~ 10×106 个细胞至少加入 0.75ml TRzol LS。对于含有高污染物样品如全血样品，可以用灭菌水按照 1：1 比例稀释一倍后开始提取。TRzol LS 和液体样品的终体积比总是 3：1。b.组织用glass或强力匀浆器搅匀组织样品 ，每50~ 100mg组织或者0.25ml 组织悬液加 0.75ml的 TRzol LS。一般 50~ 100mg 组织体积都要小于 0.25ml ，如果组织样品的体积小于 0.25ml ，加入灭菌水将组织样品体积调整到 0.25ml 以保证体积比例是 3：1。c.单层生长的细胞直接往直径 3.5 cm 的培养板中加入 0.3ml-0.4ml 的 TRzol LS 溶解细胞，用加样枪吹打 帮助充分裂解细胞。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的 TRzol LS 量（每10cm2 加 0.3-0.4ml）。不需要往裂解物里面加水，因为培养板中附着残留的培养 液已经充分稀释了 TRzol LS 。d.悬浮生长的细胞通过离心来沉淀细胞 。在TRzol LS试剂中用移液管反复吹打来裂解细胞。每5~ 10×10 6 的动物细胞，植物或酵母菌细胞或每 1×10 7细菌加 0.75ml 的 TRzol LS。和步骤 b 一样用灭菌水调节样品体积到 0.25ml。在加入 TRzol LS 前应避免洗涤细胞，因为那样 会增加 mRNA 降解的可能性。破裂某些酵母菌和细菌可能需要使用匀浆器。 e.病毒液处理直接取病毒液，加入 3 倍体积 TRzol LS 试剂，充分振荡混匀。2.分离阶段将匀浆样品在 15-30°C 条件下孵育 5min 以使核蛋白体完全分解。每 0.75ml TRzol LS加 0. 1ml 氯仿替代物。盖紧样品管盖，用手用力摇晃试管 15 秒并将其在室温下孵育 2~ 15min 。在 2~8°C 下以不超过 12,000×g 的离心力高速冷冻离心 15 min 。离心后混合物分成 三层：下层有机层，中间层，上层无色的水样层。RNA 无一例外地存在于水样层当中。 水样层的容量大约为所加 TRzol LS 容量的 70%。2.RNA 的沉淀将水样层转移到一干净的试管中，如果希望分离 DNA 和蛋白，有机层和中间层同 样要予以保留。通过将水样层和异丙醇混合来沉淀 RNA。每 0.75ml TRzol LS 对应 0.5ml 异丙醇。将混合的样品在 15-30°C 条件下孵育 10min 并在 2~8°C 下以不超过 12,000×g 的离 心力高速冷冻离心 10 min 。RNA 沉淀在离心前通常不可见，离心后会形成一胶状片状 沉淀附着于试管壁和管底。3.RNA 的漂洗移去上层悬液。用 75%的乙醇(RNase-Free water 配制)洗涤 RNA 沉淀一次，每 0.75ml 的TRzol LS 至少加 1ml 的 75%乙醇。旋涡振荡混合样品并在 2~8℃下以不超过 7,500×g 的 离心力高速冷冻离心 5 min。4.RNA 的再溶解室温干燥 RNA 沉淀，不要在真空管里离心干燥 RNA。尤为重要的是，不能让 RNA 沉淀完全干燥那样会极大地降低它的可溶性。部分溶解的 RNA 样品其 OD260/OD280 比值<1.6。用移液管分几次移取 RNase-Free water 来溶解 RNA，溶解后保存在-70°C。