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| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 |
| 2×Super CanaceTM High-Fidelity Mix for Library Amplification 2×Super CanaceTM High-Fidelity Mix for Library Amplification | 12620ES03 12620ES08 | 1 mL 5×1 mL | -20ºC -20ºC |
产品描述
2×Super CanaceTM High-Fidelity Mix for Library Amplification是即用型2×预混合溶液，包含High-Fidelity DNA Polymerase（保真度是普通pfu DNA聚合酶的6倍，扩增速度达15 sec/kb），dNTP以及针对高通量测序文库扩增而精心优化的缓冲体系，具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点。进行文库扩增反应时，体系只需加入引物和模板即可，简化了实验操作步骤，减少了人为误差，提高了实验通量和结果的重复性。此外，本产品还含有特异保护剂，使得预混液反复冻融后仍可维持稳定活性。
本产品已与Hieff NGSTM Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module（Cat#12608），Hieff NGSTM Fast-Pace DNA Ligation Module（Cat#12607）共同用于DNA文库构建，通过Illumina®高通量平台测序验证其有效性。本产品中提供的所有试剂组分均经过严格质检，最高程度保障产品优异性能与批间稳定性。
产品应用
基因克隆；复杂DNA模板扩增；高通量建库扩增。
质量控制
核酸外切酶残留检测：20 μL本品和0.6 μg λDNA -HindIII，37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。
核酸内切酶残留检测：20 μL本品和1 μg λDNA，37℃温育4 h，DNA的电泳谱带无变化。
大肠杆菌残留DNA检测：50 μL体系中，加入25 μL本品，以无菌ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
运输与保存方法
冰袋运输。-20ºC保存。
注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
文库扩增反应体系（冰上配制）
1. 将表1中试剂解冻后颠倒混匀，置于冰上备用。
2. 于无菌PCR管中配制表1所示反应体系。
表1 PCR扩增反应体系
| 名称 | 体积（μL） |
| 2×Super CanaceTM High-Fidelity Mix | 25 |
| Primer 1 | 2.5 |
| Primer 2 | 2.5 |
| Adapter Ligated DNA | 20 |
4. 将PCR管置于PCR仪中，设置表2所示反应程序，进行PCR扩增。
表2 PCR扩增反应程序
| 温度 | 时间 | 循环数 |
| 98°C | 1 min | 1 |
| 98°C | 10 sec | 1~15（根据实验要求） |
| 60°C | 30 sec | |
| 72°C | 30 sec | |
| 72°C | 5 min | 1 |
| 4°C | Hold | - |
使用2×Super CanaceTM高保真文库扩增预混液扩增不同GC含量（%）的DNA模板。DNA模板为3种Amplicon library，GC含量分别为38%、50%、70%。扩增循环数设置为12 cycles。PCR结束后使用1.0×磁珠（Yeasen Cat#：12601）纯化，21 μL洗脱，取1 μL进行浓度测定。
表3 Amplicon library扩增体系
| 名称 | 体积（μL） |
| 2×Super CanaceTM High-Fidelity Mix | 25 |
| Primer 1 (10 μM) | 2.5 |
| Primer 2 (10 μM) | 2.5 |
| Amplicon library (0.05 ng/μL) | 20 |
表4 Amplicon library扩增产量
| GC% | 平均产量（ng/μL） |
| 38 | 26.36 |
| 50 | 17.93 |
| 70 | 17.25 |
HB170821
