StarZol 总RNA提取试剂（免氯仿）

• 本产品是传统Trizol 的免氯仿升级版；
• 提取的RNA 完整性和纯度有保证；
• 本产品适用各类动物组织、植物材料、培养细胞、细菌等样品；
• 本产品在室温下能稳定保存12个月，但保存在2~8℃的环境下，效果最佳。

1.样本处理

a.植物组织：取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将其剪碎后直接在 StarZol 中迅速研磨，每25 - 50 mg组织加入0.5 mL StarZol，混匀。

b.动物组织：取新鲜或-70℃冻存动物组织尽量剪碎，每15-50 mg组织加入0.5 mL StarZol，匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入0.5 mL StarZol 混匀。

✮注：植物和动物组织样本破碎不彻底会影响 RNA 得率和质量。

c.贴壁细胞：完全除去培养液后直接往直径3.5 cm 的培养板（约10 cm²）或常规6孔板每孔中加入0.5 mL StarZol，使之充分覆盖细胞表面，然后反复吹打裂解细胞。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的 StarZol 量。当 StarZol 量不足时可导致抽提的RNA中污染有 DNA。

✮注：贴壁培养细胞往往不能完全从培养瓶（皿）脱落，这并不意味着裂解不完全，此时细胞膜实际已经完全破裂开，并已释放出全部 RNA，继续做即可。

d.细胞悬液：离心收集细胞。加入 StarZol 试剂后反复吹吸来裂解细胞。每1-5×10⁶的动物细胞，植物细胞或每5×10⁶细菌加0.5 mL StarZol。在加入 StarZol 前应避免洗涤细胞，因为那样会增加 mRNA 降解的可能性。破裂某些细菌可能需要使用匀浆器。

e.液体样本：每200 μL（低于200 μL时，可用普通去离子水或者纯水补足）血浆、血清等液体样本，加入0.5 mL StarZol 后振荡混匀 。

2.向上述裂解液中加入2/5体积的去离子水或者纯水（普通实验室用水即可，不需要RNase-free，每500 μL StarZol 加200 µL 水)，剧烈振荡混匀，室温静置5 min。

✮注：当处理样本量大于50 mg 左右时，可延长室温静置时间到10 -15 min。

3.室温12,000 rpm离心15 min。

4.离心后溶液分成上层水相(含 RNA)和下层沉淀(含蛋白质、DNA、多糖等杂质)，小心吸取上层水相至一个新的离心管中。

✮注：上层水相约占总体积的90%，如用500 μL StarZol 进行提取，上层水相约为630 μL，建议吸取500 μL；提取微量样本时，为减少 RNA 损失，可以全部转移上清。

✮注:当样本量较小时，离心后可能不会出现下层沉淀，属于正常现象，可继续按后续步骤完成提取。

5.加入等体积异丙醇，颠倒混匀，室温静置10 min。

6.室温12,000 rpm离心10 min。通常可以看见白色沉淀，小心弃去上清.

✮注: RNA 沉淀在离心前通常不可见，离心后在管侧壁和管底形成薄片状沉淀（样品量少的情况下，RNA 沉淀散在管侧壁和管底有可能看不到明显沉淀）。部分组织材料由于含有较多的代谢产物，导致沉淀不能聚集而分散在离心管壁上，此时，请沿液面缓慢吸取上清。

7.加入1 mL 75%乙醇(RNase-free ddH₂O配制)漂洗，涡旋震荡15 sec，让沉淀悬浮起来，并上下颠倒数次。

8.室温12,000 rpm离心3 min，小心弃上清。

9.重复步骤7和8漂洗一遍，小心弃尽上清。

✮注:为减少杂质残留，应尽可能的将上清弃干净。建议弃去大部分上清后，短暂点甩离心将残留液体甩至管底，用200 μL 吸头吸尽残留的液体，保留管底及管侧壁的白色 RNA 沉淀。

10.室温晾干约1 min，加入适量约50 -100 μL RNase-free ddH₂O溶解沉淀，轻弹离心管底，让水充分接触管底和管侧壁的沉淀帮助溶解 RNA （可用移液器反复吹打管底和管侧壁的沉淀帮助溶解），使 RNA 沉淀充分溶解。提取的 RNA 产物可以分装后在- 85 ~ - 65℃长期保存，在- 30 ~ - 15℃仅可短期保存。

✮注：一般稍稍晾干 RNA 即可，过度干燥会导致 RNA 难于溶解。

✮注：从某些样本提取 RNA 时，RNA 沉淀并非完全聚集在离心管管底，而是也以均匀的薄雾状沉淀吸附在管侧壁上。请注意仔细观察，并用移液器吹打管底和沉淀所在的管侧壁充分溶解所有的 RNA。