本产品采用经典配方,用于细胞或组织总RNA抽提的试剂。能很好提取动物细胞或组织及细菌的总RNA;但对植物组织RNA的提取有选择性。模式植物(拟南芥,小麦,烟草,玉米,大豆)能提取较好的 RNA。但一些多糖多酚含量高的植物(西红柿,银杏,梧桐,毛白杨，棉花等)叶片使用时不能提取RNA。建议使用该试剂提取植物RNA时,要做RNA提取的预实验。
产品特点
1、可以抽提长达15 kb的RNA,也可以抽提microRNA等小RNA。抽提小RNA时宜70°C沉淀过夜。
2、抽提所得RNA无DNA和蛋白污染。一般所得RNA溶于DEPC水后的A260/280值为1.8-2.。
3、每一百万细胞可得5-15μg RNA，每毫克组织可得1-10μg RNA。产量因细胞和组织不同而异。
4、抽提所得RNA可直接用于Northern, 点杂交,纯化mRNA,体外翻译,RNase protein assay, cDNA克隆,以及RT-PCR,也可用于基因表达芯片分析,高通量测序等对RNA质量要求较高的情况。
使用方法
1、细胞裂解或组织匀浆。
1-1、贴壁细胞
吸尽培养液,每10平方厘米细胞加入1ml试剂， 一般六孔板每孔加1ml, 12孔板每孔加0.5mlo晃动3-5下，再用枪吹打2-3下，确保全部裂解,然后吸至离心管中。
1-2、悬浮细胞
离心收集细胞,吸尽液体,每五百万至一千万动植物或酵母细胞,或一千万细菌,加入1ml试剂，用枪吹打或适当vortex,确保全部裂解。某些酵母和细菌如裂解不充分,可用匀浆器匀浆,确保全部裂解。
1-3、组织
1-3-1、植物组织:植物叶片直接放入研钵中,加入少量液氮,迅速研磨成粉末,每50-100mg植物叶片加入1ml试剂。
1-3-2、动物组织:按10-30mg组织加入1ml试剂, 用电动匀浆器或者-次性研磨杵充分匀浆。
2、对于某些蛋白,多糖或脂含量很高的细胞或组织, 裂解后可能会有不溶物或油脂状漂浮物。需12,000g 4°C离心10分钟,然后吸取澄清的裂解产物至新的离心管中。
3、室温放置5分钟,使样品充分裂解。
4、每毫升试剂加0.2ml氯仿, vortex混匀或猛烈晃动15秒,室温放置2-3分钟。
5、12,000g 4°C离心15分钟,然后吸取含总RNA的上层无色水相至一新的离心管中, 每毫升试剂约可吸取0.5-0.55ml。
6、加入与.上清等体积的冰冷异丙醇,颠倒数次混匀,室温沉淀10分钟。如果希望提取microRNA等小RNA, .推荐-70°C沉淀过夜。
7、12,000g 4°C离心10分钟,在管底可见RNA沉淀,弃上清。
8、每毫升最初的试剂加入1ml 75%乙醇(DEPC水配制), vortex或颠倒混匀,
9、7,500g 4°C离心5分钟,弃上清。再用离心机甩- - 下(>5,000rpm,离心1秒)，小心吸尽液体。
10、待RNA略干后,加入20-50 μl DEPC水溶解，-70°C冻存。(注意:切勿让RNA过分干燥,否则将极难溶解，且测出的A260/280值会低于1.6.)
注意事项
1、需自备氯仿,异丙醇, DEPC, 75%乙醇(DEPC水配制),和DEPC水。
2、所有离心管,枪头及相关溶液都必须无RNA酶污染。耐高温器物可150°C烘烤4小时以去除RNA酶,其它器物去除RNA酶可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜,然后灭菌,烘干。溶液需用DEPC水配制。加0.01% (体积比) DEPC至重蒸水或MiliQ级水中，处理过夜,灭菌即成DEPC水。
3、使用冻存的细胞或组织抽提总RNA的效果通常比新鲜的细胞或组织差一些。 因为在细胞或组织冻融过程中-些细胞或组织内的RNase会被释放出来并剪切样品。如果不能及时抽提RNA,推荐先加入适量试剂, 并裂解样品后冻存。
4、必须戴-次性手套操作,且尽量不要对着RNA样品说话,以防RNA酶污染。建议戴一次性口罩操 作。
5、试剂含有毒物质苯酚,避免接触皮肤或吸入。为防止溅入眼睛,请戴防护眼镜或使用透明保护屏。如皮肤接触试剂,请立即用大量去垢剂和水冲洗,如仍有不适,请听取医生意见。
6、试剂抽提总RNA的同时，理论上也可抽提蛋白和DNA,但未经测试。有兴趣者可按Invitrogen公司的TRI Reagent的操作步骤进行操作。
7、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性 手套操作。
保存条件
4℃保存，一年有效。
